促紅細(xì)胞生成素在心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ椭械淖饔眉捌錂C(jī)制研究.pdf

1、背景動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的一、二級(jí)預(yù)防已經(jīng)使缺血性心臟病事件的發(fā)生率顯著下降。但是缺血性心臟病依然是大多數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家最主要的死亡病因之一。為了進(jìn)一步減少急性缺血性心臟病事件的發(fā)生率，人們?nèi)栽趯ふ腋鞣N更為有效的治療方案。促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，Epo)是由165個(gè)氨基酸組成并折疊成4個(gè)a螺旋的糖蛋白。屬于Ⅰ型細(xì)胞因子超家族，分子量約為30.4kDa。Epo最早運(yùn)用于慢性腎功能衰竭相關(guān)性貧血治療。此后Bernaudin等發(fā)

2、現(xiàn)其在腦缺血及神經(jīng)組織的機(jī)械性損傷中也發(fā)揮著保護(hù)作用，多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明，腦組織局部及全身運(yùn)用Epo可防治缺血誘發(fā)的神經(jīng)元損傷。相似的，通過(guò)動(dòng)物模型人們逐漸認(rèn)識(shí)到Epo的心肌保護(hù)作用。近年來(lái)有部分小規(guī)模臨床實(shí)驗(yàn)提示了Epo的心肌保護(hù)效應(yīng)，但是其具體分子生物學(xué)機(jī)制尚未闡明。 目的：為了深入探討Epo在缺血性心臟病中的生理保護(hù)作用及其臨床意義。明確：1、Epo治療是否能影響心肌細(xì)胞凋亡；2、促進(jìn)血管新生、改善心肌梗塞術(shù)后心功能；3、明確E

3、PO在缺血再灌注損傷中的保護(hù)機(jī)制，我們?cè)O(shè)計(jì)了該課題。 方法： 1、通過(guò)RT-PCR及Western Blot驗(yàn)證體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞是否表達(dá)Epo的受體。采用H2O2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞凋亡，運(yùn)用Tunel染色探討Epo對(duì)H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)合細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路阻滯劑明確Epo抑制心肌細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳導(dǎo)通路。分別收集不同時(shí)間點(diǎn)的心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液，觀測(cè)Epo對(duì)心肌細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。 2、采用Ia

4、ngendroff離體心臟缺血再灌注模型，運(yùn)用不同劑量Epo觀測(cè)Epo對(duì)缺血再灌注離體心臟的血流動(dòng)力學(xué)影響；OCT染色觀測(cè)Epo對(duì)梗塞面積的調(diào)節(jié)。 結(jié)合信號(hào)傳導(dǎo)通路阻滯劑，探討Epo對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。酶譜法(Zymography Assay)及大鼠缺血再灌注模型驗(yàn)證EPO對(duì)缺血再灌注損傷后MMPs活性的調(diào)節(jié)。 結(jié)果：證實(shí)心肌細(xì)胞表達(dá)Epo受體；Epo可抑制H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡、下調(diào)心肌細(xì)胞促凋亡相

5、關(guān)蛋白的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白表達(dá)。Epo通過(guò)Erk及P13K-Akt途徑抑制細(xì)胞凋亡。Epo可促進(jìn)心肌細(xì)胞VEGF的表達(dá)及內(nèi)皮細(xì)胞增殖；通過(guò)促進(jìn)心肌細(xì)胞分泌VEGF，EPO可間接對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖發(fā)生調(diào)控。利用Langendroff離體心臟缺血再灌注模型，運(yùn)用不同劑量Epo證實(shí)Epo可改善缺血再灌注離體心臟的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)；減少缺血再灌注損傷后梗塞面積。Epo激活了Jak2-Erk信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)了CollagenⅠ/Ⅲ的表達(dá)，抑制了M

6、MP2及MMP9的表達(dá)。MEK拮抗劑可抑制Epo的這一保護(hù)作用。在1周的隨訪期中EPO顯著抑制了心肌缺血再灌注損傷后MMPs的活性。 結(jié)論： 1、心肌細(xì)胞可表達(dá)EPO的受體，EPO經(jīng)由Erk及Akt途徑抑制心肌細(xì)胞凋亡； 2、EPO促進(jìn)心肌細(xì)胞VEGF的合成分泌，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖； 3、EPO治療可顯著提高心肌梗塞術(shù)后小鼠的生存率、改善心功能、抑制心臟組織凋亡、促進(jìn)血管新生。 4、EPO可通過(guò)Er