新型靶向性肽型DNA載體研究.pdf

1、基因治療給很多疾病的治療提供了希望,但是目前依然缺乏安全、高效并能靶向性運(yùn)輸基因到相應(yīng)細(xì)胞中的載體。雖然病毒載體可以有效運(yùn)輸基因到細(xì)胞中發(fā)揮作用,但其也有一系列的缺點(diǎn),例如:構(gòu)建和使用較為復(fù)雜,只能攜帶較小分子量的基因,容易引起炎癥反應(yīng)以及潛在的安全性問(wèn)題等,這些都嚴(yán)重限制其在生物醫(yī)學(xué)以及臨床上的應(yīng)用。所以,研究者們發(fā)展了一系列人工合成的非病毒載體,它們對(duì)貨物分子尺寸的要求更加寬松,免疫原性更低,而且使用也更加方便。在這些非病毒載體中,

2、陽(yáng)離子脂質(zhì)體和高聚物由于其使用簡(jiǎn)便以及具有相對(duì)較高的運(yùn)輸效率而得到了廣泛的使用和研究。然而,由于它們具有毒性上的局限,發(fā)展新型的能夠運(yùn)輸DNA到動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的低毒、高效非病毒載體仍然十分必要。
　　肽型DNA載體是一種新型非病毒DNA載體,與其它非病毒DNA載體(例如:脂質(zhì)體或者高聚物)相比,它具有以下優(yōu)點(diǎn):易于合成,低免疫原性,生物相容性好,在體內(nèi)容易被降解等。并且,對(duì)肽型DNA載體的結(jié)構(gòu)修飾也較容易進(jìn)行,從而使其具有不同

3、的功能,因此,有可能具有更廣泛的應(yīng)用前景。然而,已有的肽型DNA載體都對(duì)細(xì)胞或者組織沒(méi)有靶向性,而靶向性則是基因治療的前提需求之一。所以,發(fā)展能夠靶向性運(yùn)輸DNA到相關(guān)細(xì)胞的肽型載體對(duì)于基因治療十分有意義。
　　細(xì)胞穿膜肽是一種被廣泛使用的肽型載體。本文從新型細(xì)胞穿膜肽的構(gòu)造和性質(zhì)分析入手,首先設(shè)計(jì)并合成了一系列新型含有天然和非天然氨基酸的混合型細(xì)胞穿膜肽,對(duì)其進(jìn)入細(xì)胞的效率、細(xì)胞內(nèi)分布和抗胰酶降解能力做了檢測(cè)分析,從中篩選出適合

4、于作為DNA運(yùn)輸載體的性質(zhì)特征。
　　其次,將靶向惡性腫瘤細(xì)胞的葉酸分子加入到篩選出的細(xì)胞穿膜肽中,并對(duì)其與DNA結(jié)合的能力、包裹DNA形成顆粒的性質(zhì)和攜帶DNA進(jìn)入細(xì)胞的能力進(jìn)行了研究。結(jié)果表明這種葉酸修飾的細(xì)胞穿膜肽不能有效運(yùn)輸DNA到細(xì)胞中表達(dá),可能是因?yàn)榭臻g位阻過(guò)大或者包裹DNA所形成的納米顆粒所帶電荷過(guò)低。
　　然后,將一種靶向特定腫瘤細(xì)胞的序列作為靶向基團(tuán)加入到的細(xì)胞穿膜肽中,構(gòu)建了一種新型的肽型載體,并對(duì)它與D

5、NA結(jié)合的能力、包裹DNA形成顆粒的尺寸和表面電荷、攜帶DNA進(jìn)入各種腫瘤細(xì)胞的效率、進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)制和細(xì)胞內(nèi)分布,以及細(xì)胞毒性等方面性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明這種新型的肽型載體能夠有選擇性地?cái)y帶DNA到特定腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)。它具有易于合成、低毒性、低免疫原性、良好的生物相容性、良好的體內(nèi)降解能力以及能實(shí)現(xiàn)特定腫瘤細(xì)胞選擇性的DNA運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。
　　最后,將一段靶向神經(jīng)細(xì)胞的序列加入到細(xì)胞穿膜肽中,構(gòu)建了另一種新型的肽型載體,并對(duì)