新型靶向性聚乙烯亞胺轉基因載體的研制.pdf

1、浙江大學博士學位論文新型靶向性聚乙烯亞胺轉基因載體的研制姓名：李經(jīng)忠申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：余海曹雪濤20040501新型靶向性聚乙烯亞胺轉基因載體的研制博士研究生李經(jīng)忠導師余海教授曹雪濤教授中文摘要基岡治療有三個重要環(huán)節(jié)，即目的基因、轉基岡載體和靶細胞?；鶎鶎胂到y(tǒng)是基網(wǎng)治療的核心技術。目前，應用丁基因治療的載體主要有病毒載體系統(tǒng)利1F病毒載體系統(tǒng)。病毒載體轉染效率高，是體內(nèi)基因治療的主要I：具，但安全性存在隱患及有免

2、疫原性，體內(nèi)不能反復應辯j。而≈病毒載體具有安全性高、免疫原性低、易于對DNA進行操作等優(yōu)點，故人們愈來愈重視人J二合成的非病毒載體的研究，而解決靶向性問題是非病毒中載體中最為關注的問題，理想的載體系統(tǒng)是能將治療基因輸送到并進入特定的靶細胞，從而能在該細胞中得到有效表達，這對于惡性腫瘤基因治療尤為重要。以受體靶向的非病毒載體系統(tǒng)是最常用和有效的策略利用細胞表面表達特異性的受體或蛋白，將特定的配體分子或片段與載體連接形成分子偶聯(lián)體，使DN

3、A能靶向性地轉到表達受體的細胞。同時，針對非病毒載體的缺陷及DNA轉移過程中的內(nèi)吞小泡釋放問題、轉運入核問題，根據(jù)具體情況選擇合適的載體，并對其作迸一步的優(yōu)化、改善以獲得滿意的治療或應用效果。目前常用的非病毒載體包括裸DNA，脂質體載體及陽離子多聚物型載體等。聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)是最常用的剛離子多聚物非病毒載體，PEI可把質粒DNA縮合(condense)成數(shù)百納米大小的顆粒通過靜電作用黏附到細胞表面上

4、，被動內(nèi)吞。PEI在吞噬泡內(nèi)不能降解，同時保護DNA免受溶酶體降解；另外，PEI有滲透性腫脹效應，導致吞噬泡破裂，使DNA進入胞漿，并促進DNA進入細胞核。本實驗利用PEI作為載體系統(tǒng)的骨架，同時利用FGF受體(fibroblastgrowthfactorreceptorFGFR)和整合素在人多數(shù)腫瘤細胞和腫瘤新生血管高表達的特點，設計r能與腫瘤細胞表面相應受體結合的寡肽：堿性細胞生k岡子(basicfibroblastgrowthfa

5、ctorbFGF)寡肽、靶向丁整合素的RGD寡肽，利川交聯(lián)技術將寡肽與PEI偶聯(lián)，構建r新型的非病毒基剛載體系統(tǒng)以增加其對腫瘤細胞及其新生血管的靶向性，旨在_Lj]二惡性腫瘤基因治療的研究。研究分兩部分：第一部分，PEI轉染參數(shù)的測定及轉染條件的優(yōu)化。第二部分，靶向丁FGFR的bFGF寡肽利靶向丁整臺素的RGD寡肽的設計與合成，bFGF寡肽／RGD寡肽單靶向的PEI轉基因載體的構建及其介導基因轉移的有效性和靶向性研究；bFGF寡肽和RG