人支氣管上皮細胞5-脂氧合酶介導(dǎo)苯并(a)芘致氧化應(yīng)激與DNA損傷.pdf

1、[目的]研究在人支氣管上皮細胞(HBE)中5-LOX介導(dǎo)B(a)P產(chǎn)生氧化應(yīng)激以及氧化損傷作用，為5-LOX介導(dǎo)化學(xué)物氧化所致DNA損傷以及癌變的機制提供初步依據(jù)，進一步證明RNA干擾是一種有效的抑制5-LOX代謝活化作用的技術(shù)。
　　[方法]以不同濃度B(a)P（16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L）染毒正常HBE細胞、經(jīng)5-LOXshRNA處理的細胞以及載體對照細胞24小時，采用多功能熒光酶標儀測定細胞內(nèi)活性氧

2、(ROS)水平，分光光度計測量抗氧化酶類過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和非酶類抗氧化劑谷胱甘肽(GSH)含量，酶標儀檢測細胞內(nèi)8.羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)。檢測特異性5-LOX抑制劑AA861及其它主要代謝酶類抑制劑對上述氧化應(yīng)激和損傷指標的影響。
　　[結(jié)果]B(a)P可誘導(dǎo)HBE細胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標ROS在B(a)P處理濃度為32、64μmol/L時顯著增加(p＜0.05)，抗氧化酶SO

3、D活力隨著染毒濃度增加呈先升高后降低趨勢(p＜0.01)，CAT活力在B(a)P處理濃度為64μmol/L時顯著增強(P＜0.01),抗氧化劑GSH顯著降低(P＜0.01);同時在B(a)P處理濃度為32、64μmol/L時還可引起脂質(zhì)和DNA氧化損傷指標MDA和8-OHdG含量增加(p＜0.05)。AA-861和5-LOXshRNA處理可顯著抑制B(a)P所致的氧化應(yīng)激和氧化損傷水平，且5-LOXshRNA對氧化損傷的抑制作用更為顯著

4、。另外，CYP4501A和PGS特異性化學(xué)抑制劑a-萘黃酮與萘普生亦可在部分染毒劑量組對B(a)P引起的氧化應(yīng)激和損傷表現(xiàn)出一定的抑制作用。
　　[結(jié)論]AA-861和5-LOXshRNA對B(a)P所致HBE細胞氧化應(yīng)激及氧化損傷具有保護作用，可能與5-LOX介導(dǎo)的B(a)P代謝活化受到抑制有關(guān)，表明HBE細胞內(nèi)B(a)P可能主要通過5-LOX代謝活化誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激及DNA氧化損傷，后者與其致癌機制密切相關(guān)。而利用RNAi能更