人支氣管上皮細(xì)胞5-脂氧合酶介導(dǎo)苯并(a)芘致氧化應(yīng)激與DNA損傷.pdf_第1頁(yè)
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1、[目的]研究在人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)中5-LOX介導(dǎo)B(a)P產(chǎn)生氧化應(yīng)激以及氧化損傷作用,為5-LOX介導(dǎo)化學(xué)物氧化所致DNA損傷以及癌變的機(jī)制提供初步依據(jù),進(jìn)一步證明RNA干擾是一種有效的抑制5-LOX代謝活化作用的技術(shù)。
  [方法]以不同濃度B(a)P(16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L)染毒正常HBE細(xì)胞、經(jīng)5-LOXshRNA處理的細(xì)胞以及載體對(duì)照細(xì)胞24小時(shí),采用多功能熒光酶標(biāo)儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧

2、(ROS)水平,分光光度計(jì)測(cè)量抗氧化酶類過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和非酶類抗氧化劑谷胱甘肽(GSH)含量,酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8.羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)。檢測(cè)特異性5-LOX抑制劑AA861及其它主要代謝酶類抑制劑對(duì)上述氧化應(yīng)激和損傷指標(biāo)的影響。
  [結(jié)果]B(a)P可誘導(dǎo)HBE細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS在B(a)P處理濃度為32、64μmol/L時(shí)顯著增加(p<0.05),抗氧化酶SO

3、D活力隨著染毒濃度增加呈先升高后降低趨勢(shì)(p<0.01),CAT活力在B(a)P處理濃度為64μmol/L時(shí)顯著增強(qiáng)(P<0.01),抗氧化劑GSH顯著降低(P<0.01);同時(shí)在B(a)P處理濃度為32、64μmol/L時(shí)還可引起脂質(zhì)和DNA氧化損傷指標(biāo)MDA和8-OHdG含量增加(p<0.05)。AA-861和5-LOXshRNA處理可顯著抑制B(a)P所致的氧化應(yīng)激和氧化損傷水平,且5-LOXshRNA對(duì)氧化損傷的抑制作用更為顯著

4、。另外,CYP4501A和PGS特異性化學(xué)抑制劑a-萘黃酮與萘普生亦可在部分染毒劑量組對(duì)B(a)P引起的氧化應(yīng)激和損傷表現(xiàn)出一定的抑制作用。
  [結(jié)論]AA-861和5-LOXshRNA對(duì)B(a)P所致HBE細(xì)胞氧化應(yīng)激及氧化損傷具有保護(hù)作用,可能與5-LOX介導(dǎo)的B(a)P代謝活化受到抑制有關(guān),表明HBE細(xì)胞內(nèi)B(a)P可能主要通過(guò)5-LOX代謝活化誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激及DNA氧化損傷,后者與其致癌機(jī)制密切相關(guān)。而利用RNAi能更

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