鼻咽癌腫瘤干細胞及其表面標志物的初步研究.pdf

1、本文研究鼻咽癌中存有腫瘤干細胞的可能性，初步探討鼻咽癌腫瘤干細胞的表面標志物，為針對殺滅腫瘤干細胞的治療方法在鼻咽癌臨床治療中的應用提供依據(jù)。 [方法] 采用免疫組化SP法檢測19例鼻咽粘膜慢性炎、33例鼻咽癌和28例鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表達，檢測各指標在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移灶中的表達及其差異；采用原位雜交方法檢測EB病毒小分子RNAEBERs在鼻咽癌、鼻咽癌癌

2、旁組織中的表達；體外培養(yǎng)人低分化鼻咽癌細胞系CNE-2Z，平板克隆形成率實驗觀察CNE-2Z細胞生長增殖的情況；原代培養(yǎng)鼻咽癌組織，觀察鼻咽癌細胞在體外生長增殖能力，采用免疫細胞化學檢測鼻咽癌原代細胞以及CNE-2Z細胞中E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表達；復制CNE-2Z裸鼠移植瘤模型，采用免疫組化SP法觀察以上指標在移植瘤組織中的表達情況；采用原位雜交方法檢測EBERs在CNE-2Z細胞及其裸鼠移植瘤組織中

3、的表達；通過對比各個指標在鼻咽癌組織、鼻咽癌原代細胞、人低分化鼻咽癌細胞系CNE-2Z以及裸鼠移植瘤組織中的表達情況，初步探討各指標在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及能否成為鼻咽癌腫瘤干細胞的表面標志物。 [結(jié)果] (1)臨床標本免疫組化結(jié)果：E-cadherin和CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的陽性率分別為100％(19/19)和10.52％(2/19)，在鼻咽癌中的陽性率分別為54.54％(18/33)和75.76％(25/

4、33)，在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的陽性率分別為25.00％(7/28)和96.43％(27/28)；β-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中異常表達率分別為為10.53％(2/19)、48.48％(16/33)和78.56％(22/28)；E-cadherin、CD44H在鼻咽癌中的表達與鼻咽粘膜慢性炎組以及鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較差異均有極顯著性(P＜0.001)；β-catenin在鼻咽癌中的異常表達與鼻咽粘膜慢

5、性炎組及鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較差異均有顯著性(P＜0.05)；E-cadherin表達缺失與β-catenin異常表達呈正相關(guān)(r=0.55，P=0.006)。 (2)臨床標本原位雜交結(jié)果：EBERs在38例鼻咽癌癌旁組織中陽性率為0％(0/38)，在鼻咽癌中陽性率為84.21％(32/38)，差異有極顯著性(P＜0.001)。 (3)CNE-2Z細胞有著極強的克隆形成和成瘤能力，其平板克隆形成率為(71.88±4.52

6、)％，裸鼠移植瘤成功率為100％；在33例鼻咽癌中，E-cadherin、CD44H和β-catenin均為異質(zhì)性表達；在CNE-2Z中，E-cadherin為異質(zhì)性表達，而CD44H和β-catenin陽性表達率均為100％，呈同質(zhì)性表達；在裸鼠移植瘤組織中三者亦均為異質(zhì)性表達；EBERs在CNE-2Z細胞及其裸鼠移植瘤組織中均為陰性表達。 (4)鼻咽癌原代培養(yǎng)結(jié)果：采用組織塊培養(yǎng)法對15例鼻咽癌新鮮組織進行原代培養(yǎng)，14例有

7、癌細胞長出，隨著培養(yǎng)時間的推移，細胞數(shù)量逐漸減少，最后僅剩余極少量細胞存活，其中5例癌細胞長滿瓶壁，對其消化傳代后，癌細胞逐漸死亡，一例可見一個克隆形成。本實驗初步表明鼻咽癌中除了一小部分細胞外，絕大部分細胞不能在體外長期存活生長，這一小部分細胞可能對鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有著及其重要的作用。 [結(jié)論] (1)CD44H呈高表達，E-cadherin為低表達，β-catenin膜表達減弱或缺失，胞漿/核表達增多。CD44H高表

8、達、β-catenin異常表達及E-cadherin的低表達可能對鼻咽癌的生長、增殖和轉(zhuǎn)移起著重要的調(diào)控作用。β-catenin異常表達可能與E-cadherin表達缺失有關(guān)。 (2)EB病毒小分子RNA(EBERs)在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，但并不是鼻咽癌發(fā)生的必須條件。 (3)原代培養(yǎng)表明鼻咽癌中存在腫瘤干細胞，這部分細胞可能對鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展起著重要的作用。 (4)平板克隆形成率、裸鼠移植和免疫