海洋甾體(YC-1、5、6)與MK-801對(duì)心功能的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、甾體激素可由神經(jīng)組織自身合成。由腦組織合成的甾體激素稱為神經(jīng)甾體(neurosteroids)。神經(jīng)組織中有活性作用的甾體,無論是否由腦內(nèi)合成,無論天然的還是合成的統(tǒng)稱為神經(jīng)活性甾體(neuroactive steroids)。
　　 除經(jīng)典的基因組機(jī)制外,近年來發(fā)現(xiàn)甾體激素對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)還具快速的調(diào)節(jié)作用,這一作用的發(fā)揮通常只需要數(shù)秒甚至更短的時(shí)間,提示是一種非基因效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)表明神經(jīng)活性甾體可以作用于經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)的受體,對(duì)其介導(dǎo)的

2、反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié),其中包括GABAA受體,谷氨酸受體(如:NMDA受體,AMPA受體),σ受體等。
　　 神經(jīng)活性甾體對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的功能活動(dòng)有著廣泛的調(diào)節(jié)作用。神經(jīng)活性甾體與神經(jīng)元興奮毒性死亡、凋亡有著密切的關(guān)系,并對(duì)學(xué)習(xí)記憶有著重要的影響。
　　 我們實(shí)驗(yàn)室近兩年來發(fā)現(xiàn)一系列甾體新化物具有神經(jīng)保護(hù)作用。本文實(shí)驗(yàn)觀察海洋甾體YC-1、5、6對(duì)大鼠心功能的影響,以心肌梗死模型和原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,采用免疫印跡、膜片鉗及

3、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等技術(shù)從整體、細(xì)胞、分子三個(gè)水平對(duì)YC—1、5、6、MK-801的作用及其機(jī)制進(jìn)行探討,為神經(jīng)活性甾體在心血管系統(tǒng)作用及機(jī)制的探索提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)一:海洋甾體YC1對(duì)大鼠心功能的影響及機(jī)制研
　　 本實(shí)驗(yàn)觀察YC1對(duì)低氧心肌細(xì)胞及心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影響,探討其相關(guān)機(jī)制。方法采用電鏡、HE染色、免疫組織化學(xué)等實(shí)驗(yàn)技術(shù),復(fù)制心肌梗死模型,利用多導(dǎo)生理記錄技術(shù)記錄心功能的變化。結(jié)果心肌

4、梗死大鼠給予YC-1干預(yù)后,與心肌梗死組比較,YC-1干預(yù)組大鼠心功能明顯改善,心肌梗死區(qū)超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕,心肌梗死8h后心肌酶LDH和CK明顯減少(P<0.01),心電圖顯示ST段回落明顯。
　　 實(shí)驗(yàn)二:海洋甾體YC5對(duì)大鼠心功能的影響及機(jī)制研
　　 本實(shí)驗(yàn)觀察YC5對(duì)AMI大鼠心梗面積、心功能及心肌細(xì)胞凋亡的影響,并探討其相關(guān)機(jī)制,為尋找AMI更加有效的治療藥物奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法采用HE染色、免疫組織化學(xué)、原位

5、雜交等實(shí)驗(yàn)技術(shù),復(fù)制心肌梗死模型,利用多導(dǎo)生理記錄技術(shù)記錄心功能的變化。結(jié)果大鼠心肌梗死后給予YC-5干預(yù),與對(duì)照組比較,YC-5干預(yù)組大鼠心功能明顯改善,心肌梗死區(qū)損傷明顯減輕,心肌梗死面積明顯減少(P<0.01),Bcl-x的表達(dá)增加(P<0.01),Bax的表達(dá)減少(P<0.01),心肌凋亡減輕。
　　 實(shí)驗(yàn)三:海洋甾體YC6對(duì)大鼠心功能的影響及機(jī)制研究
　　 本實(shí)驗(yàn)觀察YC6對(duì)心肌細(xì)胞及心功能的影響,探索其相關(guān)機(jī)

6、制,為心血管疾病的治療尋找新途徑。方法采用HE染色、膜片鉗、低養(yǎng)培養(yǎng)心肌細(xì)胞、免疫組織化學(xué)、原位雜交等實(shí)驗(yàn)技術(shù),復(fù)制心肌梗死模型,利用多導(dǎo)生理記錄技術(shù)記錄心功能的變化。結(jié)果大鼠心肌梗死后給予YC-6干預(yù),與對(duì)照組比較,YC-6干預(yù)組大鼠心功能明顯改善,心肌梗死區(qū)損傷明顯減輕,單個(gè)心室肌細(xì)胞舒張性明顯改善(P<0.01),抑制單個(gè)心室肌細(xì)胞鈣瞬變(P<0.01),抑制心肌細(xì)胞L型鈣電流(P<0.01),抑制NMDA—NR1表達(dá)(P<0.0

7、1)。
　　 實(shí)驗(yàn)四:MK-801對(duì)大鼠心功能的影響及機(jī)制研究
　　 本實(shí)驗(yàn)觀察MK-801對(duì)心肌細(xì)胞及心功能的影響,探索NMDAR1在心臟中作用的相關(guān)機(jī)制和生理學(xué)意義,為心血管疾病的治療尋找新途徑。方法采用HE染色、膜片鉗、低養(yǎng)培養(yǎng)心肌細(xì)胞、免疫組織化學(xué)、原位雜交等實(shí)驗(yàn)技術(shù),復(fù)制心肌梗死模型,利用多導(dǎo)生理記錄技術(shù)記錄心功能的變化。結(jié)果大鼠心肌梗死后給予MK-801干預(yù),與對(duì)照組比較,MK-801干預(yù)組大鼠心功能明顯改善

8、,心肌梗死區(qū)損傷明顯減輕,抑制單個(gè)心室肌細(xì)胞收縮(P<0.01),抑制單個(gè)心室肌細(xì)胞鈣瞬變(P<0.01),抑制心肌細(xì)胞L型鈣電流(P<0.01)。
　　 結(jié)論:1.YC-1對(duì)心肌梗死大鼠心功能具有保護(hù)作用,其作用可能與NMDA受體相關(guān)。2.YC-5對(duì)心肌梗死大鼠心功能具有保護(hù)作用,其作用可能與抑制心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.海YC-6對(duì)心肌梗死大鼠心功能具有保護(hù)作用,其作用與YC-6能夠抑制心肌收縮和心肌L-型鈣電流有關(guān),這一作用可