缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑(YC-1)對(duì)人肝細(xì)胞癌裸鼠移植瘤的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌為我國(guó)常見惡性腫瘤之一，其中肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）約占90％以上，惡性程度高，易侵襲轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。手術(shù)切除是肝癌的首選治療方法，但手術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率仍很高，其根源在于肝癌易侵襲轉(zhuǎn)移的特性，因此，研究HCC侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要的臨床價(jià)值。缺氧是實(shí)質(zhì)性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，同時(shí)腫瘤細(xì)胞的缺氧也是腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化甚至轉(zhuǎn)移的啟動(dòng)因子。缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia induci

2、ble factor-1，HIF-1）是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，是缺氧誘導(dǎo)基因表達(dá)的中心調(diào)節(jié)因子。研究證實(shí)HIF-1α在肝癌等多種惡性腫瘤中普遍高表達(dá)，且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后等生物學(xué)特性有關(guān)。本研究應(yīng)用HIF-1α抑制劑YC-1[即3-（5’-羥甲基-2’-呋喃基）-1苯甲基引唑]對(duì)人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行藥物干預(yù)，檢測(cè)干預(yù)后裸鼠移植瘤HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表達(dá)的變

3、化，進(jìn)一步在基因及蛋白水平探討YC-1對(duì)人肝細(xì)胞癌裸鼠皮下移植瘤的影響。
　　 方法：
　　 1.對(duì)人肝細(xì)胞癌SMMC-7721細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。取1×107/ml細(xì)胞懸液接種于BALB/c nu/nu裸小鼠的右腋下皮下構(gòu)建肝癌SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤。待腫瘤生長(zhǎng)至約100-150mm3時(shí)，16只裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組（每組8只）。實(shí)驗(yàn)組給予10mg/kg YC-1[1]腹腔注射，對(duì)照組給予二甲基亞砜，每天1

4、次給藥，給藥3周后處死。
　　 2.測(cè)量?jī)山M移植瘤的長(zhǎng)徑、短徑并稱瘤重，采用RT-PCR、 Western-blot、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)裸鼠移植瘤HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過對(duì)SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察YC-1對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)組腫瘤的體積為（0.20±0.04）cm3，對(duì)照組為（0.30±0.03）cm3，體

5、積抑瘤率為33.3％；實(shí)驗(yàn)組腫瘤的重量為（0.39±0.18）g，對(duì)照組為（0.70±0.13）g，重量抑瘤率為44.3％。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組腫瘤的體積及重量均明顯小于對(duì)照組（P<0.05）。兩組均未見肝及肺轉(zhuǎn)移灶。
　　 2.半定量RT-PCR結(jié)果顯示，在肝癌細(xì)胞SMMC-7721裸鼠移植瘤中，HIF-1α mRNA的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組（0.37±0.05）和對(duì)照組（0.38±0.08）比較無顯著差異（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)組VEGF mR

6、NA的表達(dá)（VEGF1650.35±0.05， VEGF1210.11±0.02）顯著低于對(duì)照組（VEGF1650.86±0.18，VEGF1210.29±0.06）（P<0.05）。
　　 3.Western-blot檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組HIF-1α蛋白的表達(dá)為（0.89±0.24），對(duì)照組為（2.09±0.39），實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組VEGF蛋白的表達(dá)為（0.31±0.16），對(duì)照組為（0.87±0.10

7、），實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。
　　 4.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組移植瘤組織中HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示：HIF-1α、VEGF主要定位在胞漿，呈淺黃色-棕褐色；在實(shí)驗(yàn)組HIF-1α、VEGF著色強(qiáng)度均明顯弱于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：
　　 1.YC-1能夠抑制SMMC-7721肝癌細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)。
　　 2.YC-1能夠抑制SMMC-7721肝癌細(xì)胞裸鼠移植瘤HIF