消炎利膽片抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明及β-卡波林生物堿的抗炎作用機制.pdf

1、廣州地區(qū)名優(yōu)中成藥消炎利膽片為由穿心蓮、溪黃草、苦木按生藥 1 ∶1 ∶1的重量提取濃縮而成的浸膏片，作為清熱、祛濕、利膽藥，用于治療肝膽濕熱引起的口苦、脅痛和急性膽囊炎、膽管炎具有良好的療效。本課題組與暨南大學(xué)中藥及天然藥物研究所合作共同對組成消炎利膽片的三味中藥提取物進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，同時以體外抗炎活性指標(biāo)指導(dǎo)分離過程，并對分離得到的單體化合物進行體外抗炎活性評價，以期闡明消炎利膽片的抗炎作用物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找具有良好抗炎活性、作

2、用機制清楚的先導(dǎo)化合物?；钚栽u價采用以下指標(biāo)：對LPS 誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264 7釋放一氧化氮(NO)、腫瘤壞死因子(TNF α)、白細(xì)胞介素6(IL 6)的抑制活性、對環(huán)氧合酶2(COX 2)的抑制活性，首先對提取物和一級餾分進行篩選，確定了一級活性餾分；進一步對一級活性餾分進行分離，獲得二級餾分，并通過活性評價確定活性二級餾分；最后從活性二級餾分中追蹤分離得到101個單體化合物，并利用理化方法和光譜學(xué)方法鑒定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。<

3、br>　　 初步體外抗炎活性篩選結(jié)果表明，其中29個單體化合物對LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放NO、TNF α、IL 6及COX 2 酶活性具有明顯的抑制作用，作用強度與陽性藥物相當(dāng)。單體化合物 PQC74a A、PQC8a 3 51、PQC8a 3 52 活性最強，結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果表明以上三個化合物均為β卡波林類生物堿，且化合物 PQC74a A 為新化合物。本研究擬進一步研究以上三個單體化合物的抗炎分子機制。本文中采用Griess法檢測N

4、O的含量，并計算化合物對LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放NO的抑制作用，以ELISA法檢測炎癥因子TNF α和IL 6的水平，化學(xué)比色法檢測化合物對 COX 2 酶活性的抑制作用，熒光法檢測活細(xì)胞內(nèi)iNOS 酶活性，Western blot法檢測 iNOS、COX 2及內(nèi)參蛋白bactin的表達(dá)水平。結(jié)果表明以上三種β卡波林類生物堿對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放 NO、TNF α、IL 6均有明顯的抑制作用，且劑量依賴關(guān)系良好。IC50分別為：N

5、O ：9 85mol/L、4 07mol/L、3 96 mol/L，TNF α：＞30 mol/L、21 1 mol/L、9 78 mol/L，IL 6 ：24 32 mol/L、6 54 mol/L、11 30 mol/L。熒光法實驗結(jié)果表明三種β卡波林類生物堿對iNOS 酶活性有明顯的抑制作用，Western blot 結(jié)果表明三種β卡波林類生物堿均能明顯抑制iNOS 蛋白表達(dá)，但是對COX 2 蛋白表達(dá)無影響。
　　 綜上