黃荊子的抗炎活性物質(zhì)基礎(chǔ)及其品質(zhì)評(píng)價(jià).pdf

1、隨著全世界工業(yè)化進(jìn)展的加速和人類生態(tài)環(huán)境的急劇惡化，炎癥相關(guān)疾病的發(fā)病率有全球性增長的趨勢，致力于抗炎藥物的現(xiàn)代化研究和開發(fā)具有較大的現(xiàn)實(shí)意義。利用中藥對治療復(fù)雜并具有多環(huán)節(jié)發(fā)生機(jī)制的炎癥疾病的優(yōu)勢，通過闡明療效確切的傳統(tǒng)中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，從有效成分或有效部位中研究開發(fā)中藥新藥更易于與國際接軌、進(jìn)入國際市場。黃荊子（Fructus Viticis Negundinis）為馬鞭草科牡荊屬植物黃荊Vitex negundo L.的干燥成熟

2、果實(shí)。性溫，味辛、苦；歸肺、胃、肝經(jīng)。具有祛風(fēng)解表，止咳平喘，理氣消食止痛的功效，在民間多用于治療哮喘、慢性氣管炎、胃潰瘍、慢性胃炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥相關(guān)疾病。但是，目前對黃荊子的化學(xué)成分、藥理活性等基礎(chǔ)研究嚴(yán)重不足，導(dǎo)致活性部位和活性成分不明確以及沒有可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，黃荊子藥材品種的混亂及質(zhì)量的參差不齊必將對該生藥的使用產(chǎn)生不利的影響。
　　 因此，對黃荊子進(jìn)行活性部位和活性成分的跟蹤篩選，闡明其活性物質(zhì)基礎(chǔ)；以活性成分為

3、指標(biāo)評(píng)價(jià)其品質(zhì)，確保藥物有效可控，具有較高的可行性和實(shí)用性。
　　 本課題主要涵蓋以下幾方面內(nèi)容：
　　 一、活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究
　　 1.以二甲苯致小鼠耳腫脹模型，對黃荊子的80％乙醇提取物及其石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取的各部位進(jìn)行抗炎活性跟蹤篩選，篩選出二氯甲烷部位（DF）和乙酸乙酯部位（AF）為黃荊子中的活性部位。采用柱層析和制備薄層色譜等方法從AF中分離出15個(gè)化合物，并應(yīng)用理化常數(shù)測定和光譜（

4、UV，IR，MS，1H-NMR，13C-NMR，2D-NMR）分析技術(shù)鑒定了其中的12個(gè)化合物；從DF中分離出70個(gè)化合物，鑒定了其中的67個(gè)化合物，即共鑒定出79個(gè)化合物，其中21個(gè)為新化合物（包含9個(gè)木脂素，10個(gè)二萜和2個(gè)三萜），另有30個(gè)化合物為首次從黃荊植物中分離鑒定出來?；衔镱愋椭饕心局仡悾?、三萜類，黃酮類，甾體類以及一些小分子酚性化合物等。進(jìn)一步的活性篩選結(jié)果表明，以化合物VN-1為代表的苯代萘型木脂素是黃荊子中

5、具有抗炎作用的主要活性成分。從黃荊子中分得的化合物分別為：
　　 2.采用GC-MS法對黃荊子石油醚部位的親脂性成分進(jìn)行分析，從中鑒定出11個(gè)化合物。其中主要成分為亞油酸（Linoleic acid），其相對含量在石油醚部位親脂性成分中占57.22％，飽和及不飽和長鏈脂肪酸總含量占親脂性成分的90％以上。
　　 二、藥效學(xué)研究
　　 對總提取物、活性部位和單體成分進(jìn)行二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)、小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、小鼠

6、福爾馬林實(shí)驗(yàn)及體外一氧化氮生成抑制實(shí)驗(yàn)和抗氧化實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，總提物、DF和AF具有較好的抗炎作用和鎮(zhèn)痛作用，對二甲苯所致小鼠耳廓急性炎性腫脹和化學(xué)刺激誘導(dǎo)的小鼠炎性疼痛均有較好的抑制作用；從DF和AF分離得到的單體成分中，以VN-1為代表的一系列苯代萘型木脂素具有較強(qiáng)的體外一氧化氮生成抑制作用和抗氧化活性，以分子結(jié)構(gòu)中含多個(gè)羥基的VN-12、VN-50、VN-52和VN-53活性較好，此外，VN-1含量最高且具有顯著的體內(nèi)抗炎和鎮(zhèn)痛活

7、性；二萜類化合物VN-38和VN-64亦顯示了良好的體外一氧化氮生成抑制活性，其作用與抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表達(dá)相關(guān)。
　　 三、國產(chǎn)黃荊的品質(zhì)評(píng)價(jià)
　　 1.對國產(chǎn)黃荊的分布情況進(jìn)行了初步的調(diào)查，結(jié)果表明黃荊在我國長江以南地區(qū)廣泛分布，資源較豐富。從全國9個(gè)省市區(qū)采集了13個(gè)居群樣品，對這些不同產(chǎn)區(qū)黃荊子藥材進(jìn)行HPLC圖譜分析，在以HPLC-UV-DAD法建立不同來

8、源黃荊子藥材的HPLC圖譜基礎(chǔ)上，擬合出共有模式圖譜，較全面的反映了國產(chǎn)黃荊子藥材的化學(xué)特征；并發(fā)現(xiàn)不同來源黃荊子藥材之間的化學(xué)成分有較大差異，結(jié)合HPLC圖譜顯示的化學(xué)多樣性和各居群黃荊子主成分VN.1（6-羥基-4β-（4-羥基-3-甲氧基苯基）-3αa-羥甲基-7-甲氧基-3，4-二氫-2-萘醛）的含量變化差異，可將這13個(gè)不同居群的黃荊子分為3個(gè)化學(xué)型，即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。此外，指紋圖譜Q型聚類分析結(jié)果顯示，在結(jié)合線水平類間距離

9、等于10時(shí)，可將國產(chǎn)黃荊子的13個(gè)居群分為三組，與基于化學(xué)多樣性HPLC圖譜人為劃分的三個(gè)化學(xué)型相一致。
　　 2.建立了同時(shí)測定黃荊子藥材中4個(gè)苯代萘型木脂素類成分的HPLC-UV含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。4個(gè)對照品分別在3.75-150（VN-1）、3.00-120（VN-2）、1.75-70（VN-5）和3.25-130（VN-12）μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)>0.9998；測定了13個(gè)居群黃荊子藥材