倍半萜內酯衍生物DMAMCL的抗炎作用及機制研究.pdf

1、含笑內酯(micheliolide，MCL)是一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜內酯化合物。DMAMCL是MCL的二甲氨基Michael加成衍生物，改善了MCL的水溶性，使其成藥性更好。DMAMCL在體內可緩慢的釋放MCL，產生抗腫瘤作用。然而，關于MCL和DMAMCL的抗炎作用尚未有報道。本文對DMAMCL的抗炎作用進行研究，并對其作用機制進行初步探討。實驗研究包括以下幾部分:
　　1.DMAMCL對LPS誘導的RAW264.7細胞炎癥的影響

2、
　　以LPS刺激RAW264.7細胞為體外炎癥模型，觀察DMAMCL對LPS刺激RAW264.7細胞釋放NO和PGE2的影響。結果顯示，DMAMCL0.01μM、0.1μM和1μM明顯降低RAW264.7細胞NO和PGE2的釋放量(P＜0.01)，并與劑量呈現(xiàn)正相關性。實驗說明，DMAMCL在體外具有一定抗炎活性。
　　2.DMAMCL對斑馬魚中性粒細胞炎癥模型的影響
　　以Tg(mpo:gfp)斑馬魚中性粒細胞炎癥

3、模型，觀察DMAMCL對創(chuàng)傷誘導斑馬魚中性粒細胞遷移的影響。結果顯示，10-60μM DMAMCL能明顯抑制中性粒細胞的遷移。進一步說明，DMAMCL在體內也具有抗炎活性。
　　3.DMAMCL對角叉菜膠誘導的大鼠足腫脹模型的影響
　　建立角叉菜膠致大鼠足腫脹模型，以足爪腫脹度和血清NO和PGE2含量為指標評價DMAMCL的抗炎活性。實驗發(fā)現(xiàn)5、25和125mg/kg DMAMCL對于大鼠足腫脹有不同程度的抑制作用，并與劑量

4、呈正相關性。Griess和ELISA實驗結果顯示，不同濃度的DMAMCL均能明顯降低模型大鼠足爪腫脹度及血清中炎癥介質NO和PGE2的含量。實驗表明DMAMCL對于急性炎癥具有較好的治療作用。
　　4.DMAMCL對大鼠佐劑性關節(jié)炎模型的影響
　　建立大鼠佐劑性關節(jié)炎(AIA)模型，以足爪腫脹度、關節(jié)炎指數、血清TNF-α和IL-1β以及踝關節(jié)病理表現(xiàn)為指標評價DMAMCL對慢性炎癥的治療作用。實驗結果顯示，DMAMCL對大

5、鼠佐劑性關節(jié)炎有一定的治療作用。DMAMCL可以有效地降低AIA大鼠的足爪腫脹度和關節(jié)炎指數;使踝關節(jié)病理表現(xiàn)有不同程度的改善，減少滑膜增生和炎性細胞浸潤，減輕關節(jié)軟骨及軟骨下骨組織破壞程度，減少血管翳形成;抑制AIA大鼠血清分泌TNF-α和IL-1β。實驗表明，DMAMCL對慢性炎癥有治療作用，有望開發(fā)成抗炎藥物。
　　5.利用構效關系和分子對接技術初步探討DMAMCL抗炎作用機制
　　MCL與以NF-κB/p65為靶點的

6、堆心菊內酯結構非常相似。我們以堆心菊內酯為對照，將其與p65亞基進行分子對接。MCL與p65對接得分Gscore為堆心菊內酯與p65對接得分的2倍多。結果暗示，配體MCL與p65結合作用可能強于堆心菊內酯。而p65已經被確定為堆心菊內酯的抗炎作用靶點。據此，我們認為NF-κB/p65可能是MCL及其衍生物DMAMCL抗炎作用的靶點之一。
　　因此，本課題通過多種炎癥模型發(fā)現(xiàn)DMAMCL具有抗炎作用，NF-κB/p65可能是其抗炎作