丹參對(duì)奶牛脂肪變性肝細(xì)胞NF-kB和CYP450表達(dá)的影響.pdf

1、脂肪肝是奶牛常見(jiàn)病之一，且多發(fā)于圍產(chǎn)期高產(chǎn)奶牛。脂肪肝不僅會(huì)導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量下降，而且會(huì)誘發(fā)多種其他疾病，給養(yǎng)殖戶帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。最近幾年，奶牛脂肪肝的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，但對(duì)于其發(fā)病原因及機(jī)制還不明確。雖然很多研究人員對(duì)其相關(guān)發(fā)病機(jī)理進(jìn)行了大量的探究，但從細(xì)胞水平上，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)手段來(lái)研究其發(fā)病機(jī)制并不多見(jiàn)。關(guān)于CYP450和NF-κB與奶牛脂肪肝形成關(guān)系的研究較少，其作用機(jī)制不甚明確，值得深入探討和研究。
　　本研

2、究采用膠原酶兩步灌流法，成功的分離培養(yǎng)了奶牛原代肝細(xì)胞。用DL-乙硫氨酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性后，采用生化法測(cè)定ALT、AST、TG、TC的含量或活性，MTT法測(cè)定肝細(xì)胞的存活率，油紅O染色法觀察肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量、顏色和大小。根據(jù)以上所測(cè)數(shù)據(jù)及對(duì)油紅染色圖片的觀察和分析，篩選建立奶牛肝細(xì)胞脂肪變性模型的最佳條件。造模成功后，用不同濃度的丹參處理變性肝細(xì)胞，檢測(cè)肝細(xì)胞中ALT、AST、TG、TC、SOD和MDA的含量或活性。采用ELISA法檢

3、測(cè)奶牛肝細(xì)胞內(nèi)TNF-α的含量，油紅O染色法觀察肝細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)量、顏色和大小，Western blot法檢測(cè)肝細(xì)胞中NF-κB和CYP450的蛋白表達(dá)水平。本試驗(yàn)旨在探究TNF-α、NF-κB和CYP450與奶牛脂肪肝的相互關(guān)系，揭示脂肪肝的發(fā)病原因及機(jī)制，為臨床上疾病的預(yù)防和治療提供參考。
　　結(jié)果顯示，用膠原酶兩步灌流法分離到的肝細(xì)胞，形態(tài)完整，貼壁良好，存活率約94％，可用于本試驗(yàn)進(jìn)一步的研究。DL-乙硫氨酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞后，根

4、據(jù)所測(cè)肝細(xì)胞中TG、TC含量變化結(jié)果，MTT法所測(cè)細(xì)胞存活率及對(duì)油紅染色圖片的觀察和分析，最終選定2 mmol/L的DL-乙硫氨酸培養(yǎng)24 h作為最佳的造模條件。丹參處理脂肪變性肝細(xì)胞后，能降低ALT、AST、TG、TC和MDA的含量或活性，抑制TNF-α的釋放，增加SOD活性。隨丹參濃度增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，CYP450的表達(dá)呈逐漸降低的趨勢(shì)。24h時(shí)，丹參對(duì)NF-κB的表達(dá)無(wú)明顯影響;48h時(shí)，隨丹參濃度的增加，NF-κB的表達(dá)呈逐