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文檔簡介
1、目的:根據(jù)前期試驗(yàn)選擇合適濃度的乙醇建立酒精體外誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性模型,確定不同濃度的軟脂酸對酒精體外誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性及損傷的影響,并探討其影響機(jī)制。
方法:根據(jù)前期試驗(yàn),選擇對細(xì)胞存活率影響不大且可以建立肝細(xì)胞脂肪變性模型的乙醇濃度為制備本實(shí)驗(yàn)肝細(xì)胞脂肪變性模型的乙醇濃度(0.6%),采用MTT法測定不同濃度的軟脂酸(2.5、5、10、20、30、40μmol/L)對酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞存活率的影響,光學(xué)顯
2、微鏡觀察不同組別油紅O染色情況,全自動生化儀檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中ALT、AST泄露量,試劑盒檢測各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)水平,采用Westernblot法檢測各組細(xì)胞核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量。
結(jié)果:
1.用MTT法測得酒精誘導(dǎo)組的肝細(xì)胞的存活率較空白對照組降低;軟脂酸干預(yù)后,與酒精誘導(dǎo)組相比,當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時,肝細(xì)胞的存活率增高;當(dāng)軟脂酸的濃度≥20μmol/L時,細(xì)胞的存活率則降低,
3、且隨著軟脂酸濃度的增加存活率依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.肝細(xì)胞在加入了含0.6%的乙醇的培基中培養(yǎng)大于或等于兩天,油紅O染色可見肝細(xì)胞胞漿內(nèi)含有大小不一被染成橘紅色的脂滴,而空白對照組肝細(xì)胞內(nèi)無明顯脂滴形成。如同時加入軟脂酸共同培養(yǎng)48小時,當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時,肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴較酒精誘導(dǎo)組減少,且軟脂酸濃度越大,減少作用越明顯;相反,當(dāng)軟脂酸濃度≥20μmol/L時,肝細(xì)胞內(nèi)脂滴增加,且隨
4、著軟脂酸濃度的增大,增加作用越明顯。
3.用0.6%的乙醇干預(yù)人正常肝細(xì)胞L-02后ALT、AST泄漏量、細(xì)胞內(nèi)TG含量均比空白對照組高(P<0.05);軟脂酸共同培養(yǎng)48小時后,與酒精誘導(dǎo)組相比,當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時,上述指標(biāo)均降低,且隨著軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05),當(dāng)軟脂酸濃度>20μmol/L時,上述指標(biāo)均升高,ALT、AST隨軟脂酸濃度的升高而依次升高(P<0.05),當(dāng)軟脂酸濃度為40
5、μmol/L時TG的量較20、30μmol/L時降低(P<0.05)。
4.用0.6%的乙醇干預(yù)后肝細(xì)胞核內(nèi)成熟的SREBP-1 c的表達(dá)量較空白對照組升高(P<0.05);軟脂酸共同培養(yǎng)48小時后,與酒精誘導(dǎo)組相比,當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時,核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量降低,且隨軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05);當(dāng)軟脂酸濃度≥20μmol/L時,核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量升高,且隨著軟脂酸濃度
6、的增加而依次增高(P<0.05)。
結(jié)論:
1.0.6%的乙醇作用于肝細(xì)胞兩天或多于兩天可以建成肝細(xì)胞脂肪變性模型,并且可以引起肝酶泄漏量的增高,且肝細(xì)胞脂肪變性與核內(nèi)成熟的SREBP-1c的表達(dá)量增高有關(guān)。
2.軟脂酸干預(yù)后,在一定濃度內(nèi)對酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞有防治作用,且呈劑量效應(yīng)關(guān)系;超出一定濃度卻反過來加重肝細(xì)胞的脂肪變性。
3.軟脂酸對酒精誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞的影
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