軟脂酸對(duì)酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:根據(jù)前期試驗(yàn)選擇合適濃度的乙醇建立酒精體外誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性模型，確定不同濃度的軟脂酸對(duì)酒精體外誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性及損傷的影響，并探討其影響機(jī)制。
　　 方法:根據(jù)前期試驗(yàn)，選擇對(duì)細(xì)胞存活率影響不大且可以建立肝細(xì)胞脂肪變性模型的乙醇濃度為制備本實(shí)驗(yàn)肝細(xì)胞脂肪變性模型的乙醇濃度(0.6％)，采用MTT法測(cè)定不同濃度的軟脂酸(2.5、5、10、20、30、40μmol/L)對(duì)酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞存活率的影響，光學(xué)顯

2、微鏡觀察不同組別油紅O染色情況，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中ALT、AST泄露量，試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)水平，采用Westernblot法檢測(cè)各組細(xì)胞核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量。
　　 結(jié)果:
　　 1.用MTT法測(cè)得酒精誘導(dǎo)組的肝細(xì)胞的存活率較空白對(duì)照組降低；軟脂酸干預(yù)后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時(shí)，肝細(xì)胞的存活率增高；當(dāng)軟脂酸的濃度≥20μmol/L時(shí)，細(xì)胞的存活率則降低，

3、且隨著軟脂酸濃度的增加存活率依次降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.肝細(xì)胞在加入了含0.6％的乙醇的培基中培養(yǎng)大于或等于兩天，油紅O染色可見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)含有大小不一被染成橘紅色的脂滴，而空白對(duì)照組肝細(xì)胞內(nèi)無(wú)明顯脂滴形成。如同時(shí)加入軟脂酸共同培養(yǎng)48小時(shí)，當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時(shí)，肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴較酒精誘導(dǎo)組減少，且軟脂酸濃度越大，減少作用越明顯；相反，當(dāng)軟脂酸濃度≥20μmol/L時(shí)，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴增加，且隨

4、著軟脂酸濃度的增大，增加作用越明顯。
　　 3.用0.6％的乙醇干預(yù)人正常肝細(xì)胞L-02后ALT、AST泄漏量、細(xì)胞內(nèi)TG含量均比空白對(duì)照組高(P<0.05)；軟脂酸共同培養(yǎng)48小時(shí)后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時(shí)，上述指標(biāo)均降低，且隨著軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05)，當(dāng)軟脂酸濃度>20μmol/L時(shí)，上述指標(biāo)均升高，ALT、AST隨軟脂酸濃度的升高而依次升高(P<0.05)，當(dāng)軟脂酸濃度為40

5、μmol/L時(shí)TG的量較20、30μmol/L時(shí)降低(P<0.05)。
　　 4.用0.6％的乙醇干預(yù)后肝細(xì)胞核內(nèi)成熟的SREBP-1 c的表達(dá)量較空白對(duì)照組升高(P<0.05)；軟脂酸共同培養(yǎng)48小時(shí)后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當(dāng)軟脂酸濃度≤10μmol/L時(shí)，核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量降低，且隨軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05)；當(dāng)軟脂酸濃度≥20μmol/L時(shí)，核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達(dá)量升高，且隨著軟脂酸濃度

6、的增加而依次增高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.0.6％的乙醇作用于肝細(xì)胞兩天或多于兩天可以建成肝細(xì)胞脂肪變性模型，并且可以引起肝酶泄漏量的增高，且肝細(xì)胞脂肪變性與核內(nèi)成熟的SREBP-1c的表達(dá)量增高有關(guān)。
　　 2.軟脂酸干預(yù)后，在一定濃度內(nèi)對(duì)酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞有防治作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系；超出一定濃度卻反過(guò)來(lái)加重肝細(xì)胞的脂肪變性。
　　 3.軟脂酸對(duì)酒精誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞的影