周期序貫聯(lián)合免疫抑制劑治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:為了從臨床實(shí)踐上升到理論認(rèn)識(shí)的高度，本文探討周期序貫聯(lián)合免疫抑制劑(長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷酰胺)治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究，以闡明序貫聯(lián)合用藥協(xié)同效應(yīng)機(jī)制。 方法:本研究分兩部分進(jìn)行： 第一部分：系統(tǒng)性紅斑狼瘡動(dòng)物模型的選擇和建立 動(dòng)物模型選取慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取6-8周齡雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1雜交鼠及6-8周齡雌性DBA/2小鼠，體重(18-20)g。制作慢性移

2、植物抗宿主病(cGVHD)狼瘡樣小鼠模型36只。造模前及造模6周時(shí)分別留取血尿檢測(cè)尿蛋白定量、血肌酐、血抗雙鏈DNA抗體并各處死解剖小鼠3只，剩余30只小鼠模型進(jìn)入第二部分研究。 第二部分：VCR+CTX周期聯(lián)合治療SLE動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究選取慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型30只，隨機(jī)分五組：空白對(duì)照組、VCR間歇給藥組、CTX間歇給藥組、CTX隔日給藥組及VCR+CTX聯(lián)合間歇給藥組。間歇給藥為每隔三周(20天)給予一次，隔

3、日給藥為每隔一天給予一次。從誘導(dǎo)開(kāi)始到全部處死動(dòng)物，歷時(shí)24周。 檢測(cè)項(xiàng)目： 1.一般情況，包括體重、精神狀態(tài)、存活。 2.血液檢測(cè)外周血白細(xì)胞、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清肌酐、血清雙鏈DNA抗體、ELISA檢測(cè)血TGF-β1、血MCP1、血BAFF。 3.尿液檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、尿TGF-β1、尿MCP1。 4.肝臟病理肝臟病理切片(HE染色)。 5.腎臟病理腎臟病理切片(HE染色、Mas

4、son染色、PSAM染色、免疫熒光染色C3及IgG)免疫組織化學(xué)法定位測(cè)定TGF-β1、MCP1。 6.半定量RT-PCR.測(cè)定TGF-β1、MCP1的mRNA在腎臟的表達(dá)。 7.脾臟病理免疫組化法定位測(cè)定BAFF、BAFFR。 8.半定量RT-PCR測(cè)定BAFF、BAFFR的mRNA在脾臟的表達(dá)。 統(tǒng)計(jì)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析、相關(guān)分析、析因分析等。 結(jié)論: 1

5、.慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型可出現(xiàn)狼瘡腎炎Ⅳ型病理改變及MCP-1、TGFβ1、BAFF的表達(dá)排泌增加。 2.序貫周期聯(lián)合VCR和CTX聯(lián)合治療有交互作用，在降低24小時(shí)尿蛋白定量，血清肌酐，血清BAFF，減少腎臟MCP-1的表達(dá)和排泌等方面為協(xié)同作用，與CTX隔日用藥組相當(dāng)，優(yōu)于VCR間隔治療組、CTX間隔治療組。 3.VCR+CTX聯(lián)合間歇給藥與單用藥比較不良反應(yīng)并沒(méi)有增加，比較安全。CTX隔日給藥組的不良反應(yīng)