X染色體隱性遺傳性生長激素缺乏癥家系候選基因定位研究.pdf

1、兒童矮小癥是指在相似環(huán)境下，兒童的身高較正常的同種族、同年齡、同性別的人群身高均值低于2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差(-2SD)以下或處于第3百分位以下。生長激素缺乏癥(GHD)是臨床常見的矮小癥，其發(fā)病率約為1/5000～1/4000,該病若不能及時(shí)診斷和治療，將會(huì)導(dǎo)致成年后身材顯著矮小、心血管疾病發(fā)生率升高，而且有相當(dāng)多病例伴有性腺發(fā)育不良、中樞性甲狀腺功能低下和促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)缺乏癥。GHD大多為散發(fā)發(fā)病，屬常染色體隱性或顯性遺傳病，按遺

2、傳方式不同可分為3型：IGHDⅠ型為常染色體隱性遺傳，IGHDⅡ型為常染色體顯性遺傳，IGHDⅢ型為X連鎖隱性遺傳。
　　 [研究目的]：通過對(duì)一個(gè)生長激素缺乏癥家系進(jìn)行家系調(diào)查、分子生物學(xué)技術(shù)檢測，以期發(fā)現(xiàn)該家系生長激素缺乏癥的候選致病基因關(guān)鍵區(qū)域，甚或發(fā)現(xiàn)致病基因。
　　 [研究內(nèi)容和方法]：1、家系調(diào)查及臨床治療：對(duì)一家系祖孫三代進(jìn)行家系調(diào)查，對(duì)家族中矮小癥患者進(jìn)行生長激素藥物激發(fā)試驗(yàn)及相關(guān)臨床資料收集。2、SOX

3、3基因檢測：家系16位成員抽提外周血DNA，設(shè)計(jì)引物，對(duì)5位GHD患者進(jìn)行SOX3基因外顯子及SOX3基因拷貝數(shù)變異檢測。3、微衛(wèi)星DNA多態(tài)性標(biāo)記定位研究：抽提外周血基因組DNA，利用熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物長度多態(tài)分析方法(微衛(wèi)星DNA多態(tài)性標(biāo)記，STR)對(duì)家系運(yùn)用STR位點(diǎn)進(jìn)行分型；并采用軟件MERLIN對(duì)家系的染色體候選區(qū)域進(jìn)行矮小癥連鎖分析(linkage程序)以及單倍型推斷(Haplotyping程序)。4、人基因組全外顯子測序及候

4、選基因驗(yàn)證：應(yīng)用全基因組外顯子測序技術(shù)對(duì)該生長激素缺乏癥家系3位成員(2位患者及1位正常表型的患者舅舅)進(jìn)行全基因組外顯子區(qū)域的DNA序列捕獲，結(jié)合生物信息分析技術(shù)，找到該家系特有的SNP，從而發(fā)現(xiàn)候選基因；再根據(jù)候選基因設(shè)計(jì)引物，在家系成員中進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 [研究結(jié)果]：1、家系調(diào)查分析該家系譜有以下特點(diǎn)：1.1、該家系中只有男性發(fā)病，而女性不發(fā)病。1.2、雙親無病、兒子發(fā)病、女兒不發(fā)病，表明患兒的致病基因是從攜帶者母親遺傳

5、而來。1.3、患者的兄弟、舅父、姨表兄弟均患病。據(jù)此，臨床上推斷其遺傳模式符合X性染色隱性遺傳。3位患者給予人重組生長激素治療后生長速率改善顯著，終身高將得到改善。2、該家系16位成員SOX3啟動(dòng)子500bp及外顯子篩查未見突變；樣本3(Ⅱ4)中的SOX3基因表達(dá)量約為其他樣本表達(dá)量的2倍，未發(fā)現(xiàn)SOX3基因拷貝數(shù)異常。3、家系STR連鎖分析結(jié)果顯示位點(diǎn)DXS987和位點(diǎn)DXS1226表現(xiàn)出了很強(qiáng)的致病基因連鎖信號(hào)(LOD值=2.408

6、)。4、全基因組外顯子測序及驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)EGFL6(c.1603G＞A；p.Asp535Asn)及FTHL17(c.442G＞T，c.443A＞T；p.Glu148Leu)5位患者均為純合突變，家系女性攜帶者均為雜合突變，而其他正常男性均為野生型純合子。
　　 [研究結(jié)論]：該家系生長激素缺乏癥為X染色體隱性遺傳，其致病基因高度提示位于Xp22.3-Xp11區(qū)域，EGFL6及FTHL17是候選致病基因。
　　 本課題研究明確