五例遺傳性凝血因子Ⅴ缺乏癥的基因分析.pdf

1、遺傳性凝血因子缺乏癥是一類單基因遺傳性出血性疾病，發(fā)病率較低，但患者自幼患病，終生受累，危害性極大，更嚴重的是可以傳給后代。通過對此類疾病相關的基因突變進行研究，有助于確定診斷、有效治療和優(yōu)生優(yōu)育，而且能夠為深入認識相關凝血因子蛋白結(jié)構與功能的關系提供線索。同時，研究不同的基因突變所引起的臨床表型差異及其現(xiàn)有的凝血理論間的矛盾也將有助于豐富和完善對機體止凝血機制的認識。 目的：分別對5例遺傳性凝血因子Ⅴ(coagulatin f

2、actor V，F(xiàn)V)缺乏患者進行基因分析和家系調(diào)查，鑒定導致FV缺乏癥的基因突變。 方法：采用一期法檢測血漿F V活性，ELISA法檢測血漿F V的抗原含量，PCR法擴增FV基因的25個外顯子及其側(cè)翼序列，DNA測序并與Genebank比對以確定基因異常，限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析或直接測序患者直系家屬及正常人相應的等位基因。分子建模分析突變對整個分子空間結(jié)構的影響。 結(jié)果：5例患者血漿FV活性和抗原含量均明

3、顯降低，基因分析共發(fā)現(xiàn)6個致病突變，3個是新鑒定的突變位點，其中一個為國際上首次報道的位于B區(qū)的錯義突變。病例1在Fv基因23外顯子存在G69969T純合突變，導致導致2079Gly→Val；病例2由13外顯子雙雜合突變所致，其中一突變G45533A導致712Arg→Ter，另一突變位點C45366T導致656Cys→Tyr，通過建模分析發(fā)現(xiàn)突變后不能與575Cys形成穩(wěn)定的二硫鍵；病例3的13外顯子存在C46253T的純合突變，導致9

4、52Arg→Cys，該突變是國際上首次報道位于B區(qū)的錯義突變。病例4的13外顯子存在C46796T純合突變導致1133Arg→Ter。病例5經(jīng)檢測在3外顯子存在G16088C純合突變，導致68Asp→His，這也是一個新的突變位點，分子建模分析發(fā)現(xiàn)該突變導致分子穩(wěn)定性降低。通過對直系親屬和正常人相應的等位基因進行擴增測序或PCR．RFLP分析證實了新的突變不是基因多態(tài)性所致。 結(jié)論：G69969T、G45533A、C45366T