Leber遺傳性視神經(jīng)病變家系致病基因篩查和X染色體修飾基因的研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leber's hereditary opticneuropathy，LHON)遺傳家系及散發(fā)病例的資料收集和保存的標準化操作系統(tǒng)。
　　 2.分析HN001、HN002、HN003家系的臨床表型、遺傳特征，篩查其致病突變位點。
　　 3.研究Leber遺傳性視神經(jīng)病變可能存在的性別修飾基因，揭示LHON男女發(fā)病率不同的分子機制。
　　 方法：
　　

2、 1.對門診就診的LHON家系先證者和散發(fā)病例進行詳細的臨床檢查。分析臨床資料，調(diào)查病史、家族史，進行線粒體致病基因篩查，明確LHON診斷及鑒別診斷。入選課題組研究對象簽署《知情同意書》。采集家系相關(guān)發(fā)病信息，填寫解放軍總醫(yī)院眼科中心統(tǒng)一設(shè)計的LHON調(diào)查表。采集被研究對象外周靜脈血，提取全血基因組DNA并編號。繪制家系圖，建立科學的LHON遺傳資源數(shù)據(jù)庫，備存紙質(zhì)和電子版的資料。
　　 2.使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增HN

3、001、HN002、HN003家系線粒體DNA11778、3460、14484位點，限制性內(nèi)切酶酶切擴增片斷，并進行直接測序反應(yīng)。用專業(yè)遺傳學軟件genetool將測序結(jié)果與修正的線粒體DNA劍橋參照序列進行比對，尋找堿基改變位點，并在國際遺傳學專業(yè)網(wǎng)站中查找堿基改變位點的信息，最終確定HN001、HN002、HN003家系致病突變。
　　 3.應(yīng)用微衛(wèi)星熒光標記全基因組掃描技術(shù)分析HN001家系部分成員已知X染色體連鎖位點(D

4、XS8090、DXS984、DXS7、DXS7487)，分析單倍體型，應(yīng)用Linkage analysis Package5.0分析數(shù)據(jù)，判斷X染色體修飾基因是否與選擇的已報道的基因標記連鎖，從而判斷X染色體修飾基因的存在與否。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立了規(guī)范、科學、符合國際、國內(nèi)遺傳資源采集研究原則的Leber遺傳性視神經(jīng)病變遺傳資源的收集、保存標準化操作系統(tǒng)。
　　 2.在HN001、HN002、HN00

5、3家系中發(fā)現(xiàn)G11778A突變，在HNO01家系發(fā)現(xiàn)另外4個堿基改變位點，分別是：G11719A、G14476A、C14766T、T14783C。
　　 3.HN001家系4個已知X染色體連鎖位點(DXS8090、DXS984、DXS7、DXS7487)的單倍體型分析未發(fā)現(xiàn)共分離單倍體，連鎖分析計算LOD值均為負值。
　　 結(jié)論：
　　 1.建立Leber遺傳性視神經(jīng)病變遺傳資源收集格保存的標準化操作系統(tǒng)是十分必

6、要的，確保了資料的完整性、規(guī)范性、延續(xù)性，為今后LHON家系的陸續(xù)收集、研究提供了很好的工作模式，為今后的后續(xù)研究和流行病學統(tǒng)計提供了可能。
　　 2.HN001、HN002、HN003家系為LHON遺傳病家系，以G11778A為致病突變。G14476A為新的線粒體多態(tài)位點。該位點未引起編碼蛋白質(zhì)的改變，屬無義突變。該多態(tài)位點在100例正常人中攜帶比例為3％。
　　 3.DXS8090、DXS984、DXS7、DXS74