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文檔簡介
1、 目的:建立以加強型綠色熒光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)為報告基因檢測人單純皰疹病毒(herpessimplexvirus，HSV)感染的細胞株。 方法:提取HSV-2DNA，利用DNAStar軟件設(shè)計對應(yīng)于HSV-2(Sal5株)ICP10啟動子的PCR引物，引入BglⅡ和HindⅢ酶切位點。PCR擴增目的基因片段，將回收純化的PCR產(chǎn)物連接至pMD18-T載體構(gòu)建亞克隆，
2、切下目的基因，連接至真核表達載體pEGFP-1構(gòu)建重組質(zhì)粒pICP10-EGFP，經(jīng)雙酶切和DNA測序鑒定后，以陽離子脂質(zhì)體法(Lipofectamine2000)轉(zhuǎn)染Vero細胞。轉(zhuǎn)染48h后，加入G418(400μg/ml)篩選陽性細胞克隆，進行放大培養(yǎng)建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株Vero-ICP10-EGFP細胞。以不同量的HSV-2感染Vero-ICP10-EGFP細胞，分別于感染后6h、8h、10h，以倒置熒光顯微鏡檢測GFP熒光?！?/p>
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