應(yīng)用基因芯片研究同型半胱氨酸對ECV-304細(xì)胞基因譜表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:傳統(tǒng)的RNA方法學(xué)如Northern斑點雜交分析一次只能研究一種基因,成本高,效率低;而新興的基因芯片技術(shù),提供了一種基因差異表達(dá)的高通量研究工具.該實驗應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究了高濃度HCY對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304基因表達(dá)的影響,以探討HCY導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷和動脈粥樣硬化的基因機(jī)制.方法:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304于37℃ 5﹪CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每48小時更換培養(yǎng)液一次,密度達(dá)80﹪以后,換成不含胎牛血清的

2、DMEM培養(yǎng)液,分成對照組和實驗組,對照組加入10 μ mol/L的HCY,實驗組加入500 μ mol/L的HCY繼續(xù)培養(yǎng)24h;提取細(xì)胞RNA并經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)制成帶熒光標(biāo)記的cDNA探針,其中對照組探針用Cy3-dCTP標(biāo)記,實驗組探針用Cy5-dCTP標(biāo)記;經(jīng)預(yù)雜交、雜交、洗滌后用Scan Array 4000掃描儀掃描芯片.結(jié)論:該實驗應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究了高濃度HCY對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304基因表達(dá)的影響,共發(fā)現(xiàn)52條差

3、異表達(dá)的基因,其中,表達(dá)上調(diào)的基因5條,表達(dá)下調(diào)的基因47條.主要包括與細(xì)胞信號傳遞、細(xì)胞骨架和運動、細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄因子、蛋白質(zhì)合成、離子通道、細(xì)胞受體、免疫和代謝等相關(guān)的基因.除NM_002695(RNA多聚酶Ⅱ多肽E mRNA)、NM_001961(真核翻譯延伸因子2 mRNA)外,其余50種基因均為首次發(fā)現(xiàn)的可能參與高濃度HCY致內(nèi)皮損傷及動脈粥樣硬化的基因.該試驗首次發(fā)現(xiàn)高濃度HCY可通過影響FOXO3a、RGS5、HSF