應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究蘇丹紅Ⅰ對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞基因表達(dá)的影響.pdf

1、蘇丹紅I(C.I.no.12055)屬于親脂性偶氮化合物，是一種人工合成的工業(yè)紅色染料，動(dòng)物毒理學(xué)研究證明其具有毒性和致癌性，因此被各國(guó)明文禁止作為食品添加劑。但由于蘇丹紅I著色效果好，價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，仍有商家將其用于食品著色。然而目前關(guān)于蘇丹紅毒性的大部分研究均基于動(dòng)物細(xì)胞和染色體水平，并且在人體毒理方面的研究工作甚少。因此，蘇丹紅I的人體毒理學(xué)研究及其監(jiān)控得到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，成為環(huán)境毒理學(xué)研究的熱點(diǎn)問題之一?；蛐酒蚱渚哂心茉谵D(zhuǎn)

2、錄水平高通量、大規(guī)模、平行地處理大量基因的優(yōu)點(diǎn)，為環(huán)境毒理基因組研究提供了有力的工具。尤其是近來人類全基因組芯片技術(shù)的出現(xiàn)，使全面、綜合分析某些生命現(xiàn)象成為可能。本課題采用了人類全基因組芯片技術(shù)，分析蘇丹紅I對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞的基因表達(dá)影響，探索其對(duì)人體的毒性和致癌作用。 采用MTT檢測(cè)技術(shù)，觀察不同濃度蘇丹紅I溶液對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示，隨著蘇丹紅I濃度的增加，體外抑制率增大；繪制生長(zhǎng)抑制曲線，得到半數(shù)抑制濃

3、度IC<,50>(50％inhibitory concentrations，IC<,50>)，濃度為8.O×10<'-3>mol/L。 使用IC<,50>濃度的蘇丹紅I溶液處理淋巴細(xì)胞，分別提取和純化處理組及對(duì)照組淋巴細(xì)胞總RNA，并使用Cy5和Cy3分別對(duì)其進(jìn)行熒光標(biāo)記，混合后與美國(guó)西北大學(xué)研制的人類全基因組芯片(34，995個(gè)點(diǎn))進(jìn)行雜交。對(duì)雜交后芯片進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)提取，采用總熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)化方法(TIN)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，

4、篩選出差異表達(dá)基因，并使用ABI Panther在線分析工具對(duì)其進(jìn)行分類分析。結(jié)果顯示，篩選出的487個(gè)差異表達(dá)基因中，306個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，181個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。差異表達(dá)基因主要包括癌基因，與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞增殖、循環(huán)、分化與凋亡、免疫與防御以及氧化代謝有關(guān)的基因等。FGFR、MYB、BIRC3等基因的差異表達(dá)，提示蘇丹紅I有誘發(fā)人類肝臟和膀胱等腫瘤的傾向?；贑YPlAl等差異基因的分析，初步對(duì)蘇丹紅I急性毒性暴露的生物標(biāo)志進(jìn)行了