葉酸攝入與胃癌相關基因DNA甲基化的相關性研究.pdf

1、目的：探討葉酸干預對健康人和慢性萎縮性胃炎（chronic atrophicgastritis，CAG）患者外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclearcells，PBMC）和/或胃黏膜組織中胃癌相關基因啟動子甲基化狀態(tài)以及對正常胃黏膜上皮細胞腫瘤相關基因啟動子甲基化和表達水平的影響。
　　 方法：募集健康志愿者10 人，隨機分為兩組，分別給予口服葉酸或安慰劑5mg，每日一次，連續(xù)三個月；以及內(nèi)鏡檢

2、查病理證實為CAG 的患者5 人，亦給予葉酸5mg 口服，每日一次，連續(xù)三個月。葉酸干預前后分別留取患者血標本和/或胃鏡活檢標本。于干預前后，以化學發(fā)光酶免疫分析試劑盒測定血清葉酸濃度；以亞硫酸氫鈉測序PCR（bisulfitesequencing PCR, BSP）技術分別檢測癌基因c-myc、c-Ha-ras，抑癌基因E-cadherin、p16INK4A 和錯配修復基因hMLH1 的啟動子甲基化狀態(tài)。培養(yǎng)人正常胃黏膜上皮細胞株GE

3、S-1，分別以1mg/L、5mg/L、10mg/L 以及20mg/L 濃度葉酸進行干預，以BSP 技術及實時定量RT-PCR（quantitative real-time RT-PCR，qRT-PCR）技術檢測細胞中以上各腫瘤相關基因啟動子甲基化及RNA 表達水平改變，細胞計數(shù)試劑盒（cellcounting kit, CCK-8）測定細胞增殖活力。
　　 結果：在健康人中，葉酸干預3 個月后，PBMC 中癌基因c-myc 啟動

4、子甲基化率分別從干預前的4％、服用1 周的3.3％、服用1 月的4.1％增加到8％（t=-4.079，P<0.05），而安慰劑組無明顯變化；其他腫瘤相關基因包括c-Ha-ras、E-cadherin、p16INK4A 和hMLH1 的啟動子甲基化水平無明顯改變。而在CAG 患者組，給予葉酸干預后，癌基因c-Ha-ras 啟動子甲基化率從1.95％增加到3.35％（t=-2.908，P<0.05），而其他腫瘤相關基因包括c-myc、E-c

5、adherin、p16INK4A 和hMLH1 的啟動子甲基化水平亦無明顯改變。但在胃黏膜組織中，各胃癌相關基因啟動子甲基化狀態(tài)在干預前后均無明顯變化。各濃度葉酸干預后并不明顯影響正常胃黏膜上皮細胞增殖，葉酸干預后細胞中癌基因c-myc、c-Ha-ras 啟動子甲基化水平升高而表達下調(diào)（P<0.05），而抑癌基因E-cadherin、p16INK4A 和錯配修復基因hMLH1 甲基化水平及表達無顯著變化。
　　 結論：無論是在健

6、康人群還是CAG患者中，葉酸干預均可升高PBMC中特定癌基因如c-myc或c-Ha-ras啟動子甲基化水平，而并不影響抑癌基因如E-cadherin、p16INK4A和hMLH1的甲基化狀態(tài)。但不同的病理階段，葉酸干預的作用靶點可能并不完全相同。葉酸干預對CAG患者胃黏膜組織中以上腫瘤相關基因的啟動子DNA甲基化水平影響不大，這可能與組織特異性、葉酸用量和作用時間有關。葉酸干預正常人胃黏膜上皮細胞可能通過升高癌基因啟動子甲基化水平并下調(diào)