臍血單個(gè)核細(xì)胞靜脈移植對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠缺血再灌注性腦損傷治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）缺血再灌注性腦損傷后人臍血單個(gè)核細(xì)胞（CMNCs）靜脈移植對(duì)神經(jīng)功能的恢復(fù)作用以及探討其作用機(jī)制，為臍血單個(gè)核細(xì)胞在人類缺血性心腦血管疾病中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用羥乙基淀粉法分離臍血以獲得臍血單個(gè)核細(xì)胞（CMNCs），體外培養(yǎng)并以4.6一二胺一2苯基吲哚（DAPi）標(biāo)記標(biāo)記細(xì)胞核。線栓法建立自發(fā)性高血壓大鼠大腦中動(dòng)脈缺血模型（MCAO），符合條件的SHR分成兩組：治療組（n＝30）和

2、對(duì)照組組（n=30），同時(shí)設(shè)置假手術(shù)組（n=20）。治療組術(shù)后48h1×106 CMNCs經(jīng)尾靜脈注射至體內(nèi)，對(duì)照組注射相同體積的細(xì)胞培養(yǎng)基，假手術(shù)組SHR不栓塞大腦中動(dòng)脈且不予以移植。分別在移植后的3d、7d、14d采用Bederson評(píng)分法評(píng)估各組SHR神經(jīng)功能，利用圖像分析法精確計(jì)算經(jīng)TTC染色后治療和對(duì)照組腦組織梗死面積的百分比，倒置熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)移植組腦組織中DAPi陽性染色細(xì)胞，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測治療和

3、對(duì)照組缺血側(cè)腦組織血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的濃度，免疫組織化學(xué)法計(jì)數(shù)各組SHR腦組織中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）陽性細(xì)胞的數(shù)目，逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測移植7，14d時(shí)治療和對(duì)照組缺血側(cè)腦組織BDNFmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：（1）利用線栓法栓塞大鼠大腦中動(dòng)脈建立自發(fā)性高血壓大鼠腦缺血再灌注損傷模型成功率為73.8％，術(shù)后神經(jīng)功能評(píng)分為2.90，與假手術(shù)組相比神經(jīng)功能缺損明顯。（2）移植后1d治療和對(duì)照組

4、Bederson評(píng)分無顯著差別，移植后7、14d治療組顯著低于對(duì)照組（p<0.05）。（3）移植后1d治療和對(duì)照組腦梗死面積無顯著差別，移植后7、14d治療組顯著低于對(duì)照組（p<0.05）。（4）治療組移植后1d梗死側(cè)見少量DAPi陽性染色細(xì)胞，移植后7、14d梗死側(cè)DAPi陽性染色細(xì)胞數(shù)目增加（p<0.05）。（5）移植后14d治療組梗死側(cè)腦組織中血管內(nèi)皮生長因子濃度高于對(duì)照組（p<0.05）。（6）移植后1d對(duì)照組和假手術(shù)組BDNF

5、陽性細(xì)胞數(shù)目無顯著差別，7，14d時(shí)BDNF陽性細(xì)胞數(shù)目有所增加（P<0.05）；各時(shí)間點(diǎn)上治療組BDNF陽性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組和假手術(shù)組均明顯增加（p<0.05或<0.01）。（7）移植后7，14d時(shí)治療組梗死側(cè)腦組織BDNFmRNA表達(dá)較對(duì)照組增加（P<0.05）。 結(jié)論：1.栓塞大腦中動(dòng)脈建立自發(fā)性高血壓大鼠腦缺血再灌注損傷模型具有成功率高，制作效果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。2.臍血單個(gè)核細(xì)胞靜脈移植可明顯改善自發(fā)性高血壓大鼠腦缺血再灌注損