VEGF聯(lián)合BMSCs移植治療大鼠腦缺血再灌注損傷的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　本研究通過制備大鼠大腦中動脈腦缺血再灌注損傷模型，采用血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）移植與單用BMSCs或單用VEGF治療腦損傷，觀察神經(jīng)功能評分、腦組織梗死面積及MAP-2表達水平變化，探討VEGF和BMSCs聯(lián)合治療對大鼠腦缺血再灌注缺血損傷的神經(jīng)恢復(fù)作用及機

2、制。
　　研究方法：
　　通過全骨髓培養(yǎng)法和細胞貼壁法培養(yǎng)獲得BMSCs，利用改良線栓法制作SD大鼠（Sprague-Dawley rat,SD rat）大腦中動脈缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)(n=48)后，根據(jù)完全隨機原則分為，磷酸鹽溶液對照組（B組），BMSCs移植組（C組）、VEGF組（D組）和BMSCs+VEGF治療組（E組）。A組假手術(shù)組（n=12）麻

3、醉后，分離至頸內(nèi)動脈，不做處理即縫合皮膚。C、E組缺血再灌注24h后，通過尾靜脈分別注射2×106 BMSCs，B組予以磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution, PBS)注射，D、E組2天后VEGF鼻腔給藥。造模成功后24小時及治療14天時給大鼠進行神經(jīng)功能評分。在第14天處死大鼠，2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色觀察梗死體積，蘇

4、木素-伊紅染色(Hematoxylin&Eosin,HE)染色觀察細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，免疫組化測定微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associated protein2, MAP-2)的表達。
　　研究結(jié)果：
　　1.神經(jīng)行為學(xué)評分：假手術(shù)組0分，PBS組3.41±0.51、BMSCs組2.58±0.51、VEGF組2.67±0.47、BMSCs+VEGF組1.91±0.46分。B組明顯高于C組、D組，E組，具有明顯統(tǒng)計學(xué)

5、差異（P<0.05），BMSCs+VEGF組與其它各治療組比較差異均有顯著性意義（P<0.05）。
　　2.腦組織切片HE染色顯示：PBS組組織明顯水腫，細胞間隙增大，神經(jīng)細胞體積增大，空泡變性；BMSCs+VEGF組細胞受損程度在各組中最輕，神經(jīng)細胞數(shù)量多，胞漿豐富，低倍鏡下可見散在小的軟化灶，其余組織結(jié)構(gòu)相對較好。
　　3.梗死體積：假手術(shù)組、PBS對照組、BMSCs移植組、VEGF組、BMSCs+VEGF聯(lián)合組腦梗死體

6、積依次為0 mm3、239.58±6.89mm3、188.83±10.23mm3、186.58±8.45mm3、126.92±12mm3。BMSCs組、VEGF組與PBS對照組比較差異有顯著性意義（P<0.05）。BMSCs+VEGF組與其它治療組比較差異均有顯著性意義（P<0.05）。BMSCs移植組與VEGF組比較差異無顯著性意義。
　　4. MAP-2免疫組化染色：MAP-2表達A組0.701±0.014，B組0.304±0

7、.023，C組.413±0.0380，D組0.419±0.019，E組0.614±0.035。以B組為最低，與各治療組相比均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），C組、D組與E組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.VEGF和 BMSCs移植聯(lián)合治療大鼠腦缺血再灌注損傷的療效優(yōu)于單用VEGF或BMSCs移植。
　　2.VEGF和 BMSCs移植聯(lián)合治療促進大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)功能修復(fù)的作用機制之一可能是