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文檔簡介
1、[目的]:將從Wistar大鼠分離純化得到的雪旺細胞進行體外培養(yǎng),并聯(lián)合根據(jù)Ficoll法分離得到的人臍血單個核細胞共移植治療脊髓損傷,探討聯(lián)合移植兩種細胞在治療脊髓損傷中的作用,評價該方法的療效。 [方法]:手術(shù)取大鼠雙側(cè)隱神經(jīng),采用雙酶消化組織塊法結(jié)合機械分離法分離培養(yǎng)雪旺細胞;應(yīng)用反復(fù)組織塊培養(yǎng)法和差速貼壁法純化雪旺細胞,觀察其生長規(guī)律并鑒定。利用MASCIS(Multicenter Animal Spinal Cord
2、Injury Study)Impactor ModelⅡ脊髓打擊器制成4組共40例Wistar大鼠T10脊髓損傷模型,每組10例:DMEM實驗對照組,人臍血單個核細胞(Human Cord Blood Mononuclear Cells,HCMNCs)移植組,大鼠雪旺細胞(Schwann Cells,SCs)移植組,HCMNCs與SCs聯(lián)合移植組。大鼠脊髓損傷造模術(shù)后1周,分別將DMEM、培養(yǎng)的SCs、以及根據(jù)Ficoll法分離得到的H
3、CMNCs分別按實驗分組進行移植。術(shù)后3天開始至術(shù)后12周每周用BBB評分標(biāo)準(zhǔn)評價后肢恢復(fù)情況;術(shù)后12周,根據(jù)腳印分析實驗,計算肢體旋轉(zhuǎn)角度和肢體間協(xié)調(diào)性;術(shù)后12周后每組隨機選擇3只動物進行10%BDA順行神經(jīng)示蹤標(biāo)記,標(biāo)記2周后處死動物,取出動物損傷段脊髓作5μm快速冰凍切片后,分別進行BDA顯影熒光,免疫組化及HE染色。其中,4組實驗大鼠BBB評分采用重復(fù)測量資料的方差分析,比較不同時點指標(biāo)的變化趨勢;免疫組化染色的數(shù)字圖像經(jīng)I
4、mage pro plus5.0顯微圖像分析軟件處理,以綜合評估脊髓功能恢復(fù)程度。 [結(jié)果]:SCs經(jīng)分離純化后在體外穩(wěn)定傳4代,于鏡下觀察細胞清亮,呈兩端尖、中間膨大的長梭形,生長狀態(tài)良好,經(jīng)S-100染色后呈綠色的雙極或多極梭形形態(tài),胞核較亮,突起較暗。HCMNCs聯(lián)合SCs共移植治療脊髓損傷的實驗中,脊髓損傷后3周內(nèi),各組功能改善的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義;4周以后各組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01),其中聯(lián)合移植組的實
5、驗動物BBB功能評分最高,單純SCs移植或HCMNCs移植的評分雖然高于空白對照組,但都低于聯(lián)合移植組。腳印分析實驗中,肢體間協(xié)調(diào)性和肢體旋轉(zhuǎn)角度各組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01),聯(lián)合移植組改善亦顯著優(yōu)于其余3組。組織學(xué)觀察的結(jié)果均與功能學(xué)檢查的結(jié)果相吻合。HE和BDA染色發(fā)現(xiàn)聯(lián)合移植組損傷處空洞面積明顯小于其他組,且通過空洞的皮質(zhì)脊髓束纖維染色較多。NF-200免疫組化染色顯示聯(lián)合移植組免疫染色較對照組面積為大,且著色較深,
6、累積光密度(IOD)明顯高于對照組及單純HCMNCs移植組和SCs移植組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 [結(jié)論]:SCs可以分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子,并使脊髓損傷區(qū)域受損軸突再髓鞘化,從而促進脊髓損傷后的軸突再生和功能恢復(fù);HCMNCs在脊髓損傷區(qū)域可以向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞分化,填充組織缺損,彌補脊髓空洞,有利于神經(jīng)再生軸突的延伸和突觸之間的連接。兩者聯(lián)合移植治療脊髓損傷后,利用SCs的優(yōu)勢促進更多比例的HCM
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