大蒜拮抗內毒素作用的物質基礎及生物學活性研究.pdf

1、目的：內毒素(LPS)是G-細菌外膜的主要成分，是引起膿毒癥的主要病原分子。LPS通過其活性中心LipidA與細胞表面的受體結合，介導膿毒癥的發(fā)生。因此，阻斷LipidA與其受體的結合是防治膿毒癥的關鍵之一。大量的實踐證明：某些藥食兩用植物具有拮抗膿毒癥的功效，而且來源廣泛、培植周期短、加工簡便，有良好的應用前景。本課題以LipidA為靶點，應用生物傳感器技術平臺，在藥食兩用植物中定向分離具有拮抗膿毒癥作用的活性物質并對其生物學活性進行

2、評價。 方法：(1)應用生物傳感器技術，對大蒜、苦瓜、魚腥草、生姜、芫荽等5種藥食兩用植物進行與LipidA結合活性的篩選。(2)利用生物傳感器、硅膠柱層析、離子交換－HPLC等技術，對篩選出的藥食兩用植物中與LipidA具有結合活性的組分進行定向分離。(3)在體外，觀察活性組分與LipidA結合的親合力及對LPS刺激小鼠RAW264.7細胞分泌炎癥介質的抑制作用。(4)在小鼠體內，觀察活性組分對LPS的中和作用及對LPS血癥模

3、型小鼠炎癥介質釋放的抑制作用，并觀察其對LPS及熱滅活細菌攻擊小鼠的保護作用。(5)應用反相-HPLC技術對活性組分進行成分分析，并對主要的活性物質進行定向分離；對所得到的單體化合物進行NMR及MS等結構測定；在體外觀察其對LPS的中和作用及對LPS刺激的RAW264.7細胞分泌炎癥介質的抑制作用，以評價其生物學活性。 結果：(1)在所篩選的5種藥食兩用植物中，大蒜與LipidA結合的活性最高。(2)從大蒜中定向分離出4個與Li

4、pidA具有結合活性的組分，其中以A組分(ASLA)的結合活性最高，并對LPS攻擊小鼠具有保護作用。(3)體外實驗顯示，ASLA與LipidA具有較高的親合力；對LPS刺激的RAW264.7細胞分泌炎癥介質具有顯著的抑制作用，并呈現(xiàn)良好的量-效關系和時-效關系。(4)在體研究顯示，ASLA在小鼠體內對LPS具有顯著的中和能力；對LPS血癥模型小鼠血中的炎癥介質釋放具有顯著的抑制作用；對LPS和熱滅活的G-細菌和G+細菌攻擊的小鼠均具有顯

5、著的保護作用，并呈現(xiàn)良好的量-效關系。(5)對ASLA的成分分析顯示，ASLA主要由2個單體物質組成；我們成功地定向分離出這2個單體物質(ASLA1＃、ASLA2＃)，其純度均＞99％；結構測定的質譜顯示，ASLA1＃和ASLA2＃的基峰均是176，ASLA1＃在245和267還有兩個峰，碳譜顯示ASLA2＃有7個C原子，含有OH基團和雙鍵結構。ASLA1＃有9個C原子，ASLA1＃可能是在ASLA2＃的基礎上多了一些基團。由于在現(xiàn)有的

6、化學結構數(shù)據(jù)庫中未檢索到相應的物質，其結構暫時未能確定。生物學活性評價結果顯示，ASLA1＃和ASLA2＃在體外均具有較強的中和LPS作用及對LPS刺激的RAW264.7細胞分泌炎癥介質具有顯著的抑制作用。 結論：以LipidA為靶點，從大蒜中定向分離出一個具有拮抗膿毒癥作用的水溶性活性組分ASLA；ASLA主要由兩個活性單體化合物(ASLA1＃、ASLA2＃)組成，ASLA1＃和ASLA2＃在體外均具有較強的拮抗LPS活性，可