大蒜拮抗內(nèi)毒素作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的：內(nèi)毒素(LPS)是G-細(xì)菌外膜的主要成分，是引起膿毒癥的主要病原分子。LPS通過其活性中心LipidA與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，介導(dǎo)膿毒癥的發(fā)生。因此，阻斷LipidA與其受體的結(jié)合是防治膿毒癥的關(guān)鍵之一。大量的實踐證明：某些藥食兩用植物具有拮抗膿毒癥的功效，而且來源廣泛、培植周期短、加工簡便，有良好的應(yīng)用前景。本課題以LipidA為靶點，應(yīng)用生物傳感器技術(shù)平臺，在藥食兩用植物中定向分離具有拮抗膿毒癥作用的活性物質(zhì)并對其生物學(xué)活性進(jìn)行

2、評價。 方法：(1)應(yīng)用生物傳感器技術(shù)，對大蒜、苦瓜、魚腥草、生姜、芫荽等5種藥食兩用植物進(jìn)行與LipidA結(jié)合活性的篩選。(2)利用生物傳感器、硅膠柱層析、離子交換－HPLC等技術(shù)，對篩選出的藥食兩用植物中與LipidA具有結(jié)合活性的組分進(jìn)行定向分離。(3)在體外，觀察活性組分與LipidA結(jié)合的親合力及對LPS刺激小鼠RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)的抑制作用。(4)在小鼠體內(nèi)，觀察活性組分對LPS的中和作用及對LPS血癥模

3、型小鼠炎癥介質(zhì)釋放的抑制作用，并觀察其對LPS及熱滅活細(xì)菌攻擊小鼠的保護作用。(5)應(yīng)用反相-HPLC技術(shù)對活性組分進(jìn)行成分分析，并對主要的活性物質(zhì)進(jìn)行定向分離；對所得到的單體化合物進(jìn)行NMR及MS等結(jié)構(gòu)測定；在體外觀察其對LPS的中和作用及對LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)的抑制作用，以評價其生物學(xué)活性。 結(jié)果：(1)在所篩選的5種藥食兩用植物中，大蒜與LipidA結(jié)合的活性最高。(2)從大蒜中定向分離出4個與Li

4、pidA具有結(jié)合活性的組分，其中以A組分(ASLA)的結(jié)合活性最高，并對LPS攻擊小鼠具有保護作用。(3)體外實驗顯示，ASLA與LipidA具有較高的親合力；對LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)具有顯著的抑制作用，并呈現(xiàn)良好的量-效關(guān)系和時-效關(guān)系。(4)在體研究顯示，ASLA在小鼠體內(nèi)對LPS具有顯著的中和能力；對LPS血癥模型小鼠血中的炎癥介質(zhì)釋放具有顯著的抑制作用；對LPS和熱滅活的G-細(xì)菌和G+細(xì)菌攻擊的小鼠均具有顯

5、著的保護作用，并呈現(xiàn)良好的量-效關(guān)系。(5)對ASLA的成分分析顯示，ASLA主要由2個單體物質(zhì)組成；我們成功地定向分離出這2個單體物質(zhì)(ASLA1＃、ASLA2＃)，其純度均＞99％；結(jié)構(gòu)測定的質(zhì)譜顯示，ASLA1＃和ASLA2＃的基峰均是176，ASLA1＃在245和267還有兩個峰，碳譜顯示ASLA2＃有7個C原子，含有OH基團和雙鍵結(jié)構(gòu)。ASLA1＃有9個C原子，ASLA1?？赡苁窃贏SLA2＃的基礎(chǔ)上多了一些基團。由于在現(xiàn)有的

6、化學(xué)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫中未檢索到相應(yīng)的物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)暫時未能確定。生物學(xué)活性評價結(jié)果顯示，ASLA1＃和ASLA2＃在體外均具有較強的中和LPS作用及對LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞分泌炎癥介質(zhì)具有顯著的抑制作用。 結(jié)論：以LipidA為靶點，從大蒜中定向分離出一個具有拮抗膿毒癥作用的水溶性活性組分ASLA；ASLA主要由兩個活性單體化合物(ASLA1＃、ASLA2＃)組成，ASLA1＃和ASLA2＃在體外均具有較強的拮抗LPS活性，可