人乳頭瘤病毒16型感染特異性免疫治療的實(shí)驗(yàn)及臨床初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒16型感染特異性免疫治療的實(shí)驗(yàn)及臨床初步研究姓名:黃偉峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師:刁慶春20030501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士研究生論文細(xì)胞集落刺激因子( G M .C S F ) 、自細(xì)胞介素.4 ( I L 一4 ) 聯(lián)合誘導(dǎo)下向D C 定向分比,并負(fù)載H P V l 6 E 7 4 9 - 5 7 多肽。流式細(xì)胞儀檢測(cè)D C 特異性表面分子的表達(dá)。四唑赫比色法( M T T )

2、法檢測(cè)其在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)( M L R ) 中刺激同種淋巴細(xì)胞增殖的能力。結(jié)果:經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)生成并負(fù)載抗原的D C 光鏡下具有典型形態(tài);D C 特異性表面分子的表達(dá)率( %) 分別為:C D I a 5 8 .4 士6 .7 、C D 8 37 1 .2 + 54 、H L A .D R 7 4 .8 a :4 .2 、C D 8 0 7 0 .6 士3 .4 :M T T 法顯示其對(duì)同種淋巴細(xì)胞有較強(qiáng)的促增殖作用。結(jié)論:通過(guò)細(xì)胞因

3、子體夕卜誘導(dǎo)并負(fù)載抗原的D C 為成熟的、功能性D C 。三、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)( L D H 釋放法) 檢測(cè)負(fù)載H P V l 6 E 7 m 。,多肽D C 誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)方法:以負(fù)載H P V l 6E 7 4 9 .5 7 及乙型肝炎病毒核心抗原多肽1 8 .2 7 ( H B C l 8 _ 2 7 ) D C誘導(dǎo)的抗原特異性細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞( C T L ) 和E 7 4 9 - 5 7 多肽直接誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞為效

4、應(yīng)細(xì)胞,以C a s k i 細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)組靶細(xì)胞,S i H a 及A N 3 C A 細(xì)胞株為對(duì)照組靶細(xì)胞,運(yùn)用乳酸脫氫酶( L D H ) 釋放法檢測(cè)在1 :1 2 .5 、l :2 5 、1 :5 0 效靶比下效應(yīng)細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。結(jié)果:D C 負(fù)載H P V l 6 E 7 4 9 _ 5 7 多肽誘導(dǎo)的特異性C T L 在各效靶比均能對(duì)H L A .A 2 + 、H P V l 6 + 的C a s k i 細(xì)胞產(chǎn)生特

5、異性殺傷作用,而無(wú)關(guān)肽H B C l 8 - 2 7 致敏D C 后誘導(dǎo)的特異性C T L 對(duì)C a s k i 無(wú)明顯的殺傷活性:同時(shí)D C 負(fù)載H P V l 6E 7 4 9 .5 7 多肽誘導(dǎo)的特異性C T L 對(duì)H L A —A 2 一、H P V l 6 一腫瘤細(xì)胞S i H a 及H P V 一腫瘤細(xì)胞A N 3 C A 亦無(wú)明顯殺傷作用。E 7 4 9 .5 7 多肽直接誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞對(duì)C a s k i 也無(wú)明顯的殺傷

6、作用。結(jié)論:負(fù)載H P V l 6 E 7 4 9 .5 7 多肽的D C 體外可誘導(dǎo)高效、特異性的C T L 效應(yīng)。四、H P V l 6 E 7 一,多肽D c 治療H L A —A 2 + 、H P V l 6 + 復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者的觀察方法:H L A .A 2 + 、H P V l 6 + 復(fù)發(fā)性尖銳濕疣患者分治療組、實(shí)驗(yàn)組。各組常規(guī)電凝治療后,治療組輔以D C 免疫治療,對(duì)照組采用干擾素局部注射治療。觀察治療前后兩組患者外

7、周血T 淋巴細(xì)胞亞群和皮損的病理改變。并通過(guò)隨訪,觀察治療后各組的復(fù)發(fā)情況。結(jié)果:兩組患者治療前后外周血T 淋巴細(xì)胞亞群未見(jiàn)明顯變化。治療過(guò)程中,治療組患者保留的靶皮損變小或部分消退。治療后靶皮損處病理顯示凹空細(xì)胞明顯減少,真皮內(nèi)可見(jiàn)中等密度的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。同時(shí)治療組復(fù)發(fā)率明顯低于對(duì)照組( P < 0 .0 5 ) 。結(jié)論:負(fù)載H P V l 6E 7 4 9 .5 7 多肽的D C 在H P V 感染局部可誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答

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