乳腺癌患者中Epstein-Barr病毒和人乳頭瘤病毒16感染的初步研究.pdf

1、乳腺癌現(xiàn)已成為世界上女性最常見的癌癥類型。近年來,乳腺癌的新增病例數(shù)不斷上升,已成為威脅女性健康的最大殺手。雖然乳腺癌病因?qū)W研究不斷深入,但目前為止,尚無明確結(jié)論。生殖因素、激素水平、遺傳易感性以及飲食生活習(xí)慣等都可能是導(dǎo)致乳腺癌發(fā)生的原因,但這些因素只是其中的一部分,學(xué)者們?nèi)栽诓粩嗵剿鲗?dǎo)致乳腺癌發(fā)病的其他因素。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,越來越多的腫瘤發(fā)生被認(rèn)為與病毒感染有關(guān),比如Epstein-Barr病毒（Epstein-Bar

2、r virus，EBV）與鼻咽癌（Nasal Pharyngeal Cancer，NPC），人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）與女性宮頸癌等。EBV是一種DNA病毒,近年來EBV感染也被認(rèn)為是導(dǎo)致乳腺癌發(fā)生的一個(gè)易感因素，但大量研究并未得出一致結(jié)論。Glenn等研究表明人乳腺癌組織中可檢測(cè)到EBV的基因序列,并且其感染可能與乳腺癌的預(yù)后及進(jìn)展分期有關(guān)。然而也有學(xué)者認(rèn)為無法在乳腺癌組織中探測(cè)到EBV存在。H

3、PV也是一種DNA病毒,包括多種亞型,其中HPV16被認(rèn)為是高危亞型，關(guān)于HPV16感染如何促進(jìn)癌癥的進(jìn)展目前尚不清楚，但是在之前的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的基因變異提示 HPV16在癌癥的進(jìn)展中扮演著重要角色。Di Lonardo首次通過PCR對(duì)17名乳腺癌患者的腫瘤組織進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)HPV16的檢出率是29％。de Villiers的研究中乳腺癌患者標(biāo)本HPV的檢出率是86%(25/29)。然而,也有一些文獻(xiàn)報(bào)道稱未能在乳腺癌標(biāo)本中探測(cè)到HP

4、V表達(dá)。本課題組之前進(jìn)行的研究通過采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-MS）聯(lián)合多重PCR檢測(cè)質(zhì)譜法（PCR-mass spectrometry，PCR-MS）對(duì)乳腺癌患者的腫瘤組織、乳腺良性病變組織以及健康乳腺組織進(jìn)行了EBV、HPV等多種病毒的篩選檢測(cè)，結(jié)果

5、雖然在乳腺癌組織中檢測(cè)出EBV和HPV16陽性表達(dá)，但是對(duì)于病毒感染與乳腺癌的病理類型、病毒感染的亞細(xì)胞定位等相關(guān)內(nèi)容未能全面體現(xiàn)，因此本研究聯(lián)合使用免疫組織化學(xué)染色法、q-PCR以及熒光原位雜交方法（fluorescent in situ hybridization，F(xiàn)ISH）探討EBV和HPV16在不同病理分型的乳腺癌、乳腺良性病變以及正常乳腺中的表達(dá)情況,進(jìn)一步全面探討乳腺癌的發(fā)生與EBV和HPV16感染的相關(guān)性,以期為臨床對(duì)乳腺

6、癌的診斷、治療以及預(yù)后提供參考及依據(jù)。
　　目的:
　　初步探討乳腺癌的發(fā)生分別與EBV和HPV16感染的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.收取90例不同病理類型的乳腺癌組織標(biāo)本（包括40例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、30例浸潤(rùn)性小葉癌,20例原位癌）、20例乳腺纖維瘤以及10例乳腺正常組織標(biāo)本。所有標(biāo)本均來源于2013年6月至2014年6月就診于西京醫(yī)院的手術(shù)患者，均簽署知情同意書。
　　2.采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)上述標(biāo)本

7、進(jìn)行EBV潛在膜蛋白(LMP-1)和HPV16染色,比較不同類型乳腺組織EBV及HPV16感染檢出率、不同病理類型乳腺癌的病毒檢出率。并通過高倍鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)算有病毒感染的標(biāo)本的陽性細(xì)胞率并進(jìn)行不同病理類型乳腺癌之間陽性細(xì)胞率的比較，判斷EBV及HPV16的感染程度是否與乳腺癌的病理類型有關(guān)。
　　3.采用q-PCR方法對(duì)上述所有標(biāo)本EBV的內(nèi)部重復(fù)序列BamHIW區(qū)域和HPV16的E6基因位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，比

8、較不同類型乳腺組織的EBV及HPV16感染檢出率。
　　4.采用FISH對(duì)上述所有標(biāo)本是否表達(dá)EBV及HPV16的特異性基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)和定位，比較不同類型乳腺組織的EBV及HPV16感染檢出率、不同病理類型乳腺癌的病毒檢出率以及病毒基因特異性表達(dá)產(chǎn)物在感染細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)位置。
　　5.比較免疫組織化學(xué)法、q-PCR和FISH方法3種方法對(duì)乳腺組織標(biāo)本EBV和HPV16感染的檢出率有無差異。
　　結(jié)果:
　　1

9、.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示： EBV病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本為42.22%(38/90)，
　　乳腺纖維瘤標(biāo)本及正常乳腺組織均為0；HPV16病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本為42.22%(38/90)，乳腺纖維瘤標(biāo)本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。
　　2.感染EBV的乳腺癌組織標(biāo)本中，EBV陽性細(xì)胞率在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌為(29.73±0.51)%，浸潤(rùn)性小葉癌為(28.14±0.65)%，原位癌為(51.11±0.68)%，原位癌組的

10、 EBV陽性細(xì)胞率顯著高于其他兩種病理類型的乳腺癌組；感染HPV16的乳腺癌組織標(biāo)本中，HPV16陽性細(xì)胞率在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌為(29.78±0.38)%，浸潤(rùn)性小葉癌為(28.31±0.53)%，原位癌為(51.83±0.65)%，原位癌組的HPV16陽性細(xì)胞率顯著高于其他兩種病理類型的乳腺癌組。
　　3. q-PCR結(jié)果顯示：EBV病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本中為43.33%(39/90)，乳腺纖維瘤標(biāo)本及正常乳腺組織均為0；HPV16

11、病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本為44.44%(40/90)，乳腺維瘤標(biāo)本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。在不同病理類型乳腺癌中，EBV和HPV16的病毒檢出率無顯著差異。
　　4.熒光原位雜交結(jié)果顯示：EBV病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本中為43.33%(39/90)，
　　乳腺纖維瘤標(biāo)本及正常乳腺組織均為0；HPV16病毒檢出率在乳腺癌標(biāo)本為41.11%(37/90)，乳腺維瘤標(biāo)本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。在不同病理類型

12、乳腺癌中，EBV及HPV16的病毒檢出率無顯著差異。
　　5.免疫組化、q-PCR以及熒光原位雜交3種方法對(duì)乳腺癌標(biāo)本EBV及HPV16的檢出率不具有顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1. EBV及 HPV16兩種病毒在不同類型的乳腺癌組織中都有一定的檢出率，提示我們EBV和HPV16感染可能與乳腺癌的發(fā)生相關(guān)，但是與發(fā)生乳腺癌的病理類型無關(guān)。
　　2. EBV和HPV16的主要感染部位為乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核，提示我們