乳腺癌患者中Epstein-Barr病毒和人乳頭瘤病毒16感染的初步研究.pdf

1、乳腺癌現(xiàn)已成為世界上女性最常見的癌癥類型。近年來,乳腺癌的新增病例數(shù)不斷上升,已成為威脅女性健康的最大殺手。雖然乳腺癌病因?qū)W研究不斷深入,但目前為止,尚無明確結(jié)論。生殖因素、激素水平、遺傳易感性以及飲食生活習慣等都可能是導致乳腺癌發(fā)生的原因,但這些因素只是其中的一部分,學者們?nèi)栽诓粩嗵剿鲗е氯橄侔┌l(fā)病的其他因素。隨著分子生物學技術(shù)的不斷進步,越來越多的腫瘤發(fā)生被認為與病毒感染有關(guān),比如Epstein-Barr病毒（Epstein-Bar

2、r virus，EBV）與鼻咽癌（Nasal Pharyngeal Cancer，NPC），人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）與女性宮頸癌等。EBV是一種DNA病毒,近年來EBV感染也被認為是導致乳腺癌發(fā)生的一個易感因素，但大量研究并未得出一致結(jié)論。Glenn等研究表明人乳腺癌組織中可檢測到EBV的基因序列,并且其感染可能與乳腺癌的預(yù)后及進展分期有關(guān)。然而也有學者認為無法在乳腺癌組織中探測到EBV存在。H

3、PV也是一種DNA病毒,包括多種亞型,其中HPV16被認為是高危亞型，關(guān)于HPV16感染如何促進癌癥的進展目前尚不清楚，但是在之前的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的基因變異提示 HPV16在癌癥的進展中扮演著重要角色。Di Lonardo首次通過PCR對17名乳腺癌患者的腫瘤組織進行檢測,發(fā)現(xiàn)HPV16的檢出率是29％。de Villiers的研究中乳腺癌患者標本HPV的檢出率是86%(25/29)。然而,也有一些文獻報道稱未能在乳腺癌標本中探測到HP

4、V表達。本課題組之前進行的研究通過采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-MS）聯(lián)合多重PCR檢測質(zhì)譜法（PCR-mass spectrometry，PCR-MS）對乳腺癌患者的腫瘤組織、乳腺良性病變組織以及健康乳腺組織進行了EBV、HPV等多種病毒的篩選檢測，結(jié)果

5、雖然在乳腺癌組織中檢測出EBV和HPV16陽性表達，但是對于病毒感染與乳腺癌的病理類型、病毒感染的亞細胞定位等相關(guān)內(nèi)容未能全面體現(xiàn)，因此本研究聯(lián)合使用免疫組織化學染色法、q-PCR以及熒光原位雜交方法（fluorescent in situ hybridization，F(xiàn)ISH）探討EBV和HPV16在不同病理分型的乳腺癌、乳腺良性病變以及正常乳腺中的表達情況,進一步全面探討乳腺癌的發(fā)生與EBV和HPV16感染的相關(guān)性,以期為臨床對乳腺

6、癌的診斷、治療以及預(yù)后提供參考及依據(jù)。
　　目的:
　　初步探討乳腺癌的發(fā)生分別與EBV和HPV16感染的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.收取90例不同病理類型的乳腺癌組織標本（包括40例浸潤性導管癌、30例浸潤性小葉癌,20例原位癌）、20例乳腺纖維瘤以及10例乳腺正常組織標本。所有標本均來源于2013年6月至2014年6月就診于西京醫(yī)院的手術(shù)患者，均簽署知情同意書。
　　2.采用免疫組織化學方法對上述標本

7、進行EBV潛在膜蛋白(LMP-1)和HPV16染色,比較不同類型乳腺組織EBV及HPV16感染檢出率、不同病理類型乳腺癌的病毒檢出率。并通過高倍鏡下細胞計數(shù)對免疫組化結(jié)果進行分析，計算有病毒感染的標本的陽性細胞率并進行不同病理類型乳腺癌之間陽性細胞率的比較，判斷EBV及HPV16的感染程度是否與乳腺癌的病理類型有關(guān)。
　　3.采用q-PCR方法對上述所有標本EBV的內(nèi)部重復(fù)序列BamHIW區(qū)域和HPV16的E6基因位點進行擴增，比

8、較不同類型乳腺組織的EBV及HPV16感染檢出率。
　　4.采用FISH對上述所有標本是否表達EBV及HPV16的特異性基因表達產(chǎn)物進行檢測和定位，比較不同類型乳腺組織的EBV及HPV16感染檢出率、不同病理類型乳腺癌的病毒檢出率以及病毒基因特異性表達產(chǎn)物在感染細胞內(nèi)的表達位置。
　　5.比較免疫組織化學法、q-PCR和FISH方法3種方法對乳腺組織標本EBV和HPV16感染的檢出率有無差異。
　　結(jié)果:
　　1

9、.免疫組織化學結(jié)果顯示： EBV病毒檢出率在乳腺癌標本為42.22%(38/90)，
　　乳腺纖維瘤標本及正常乳腺組織均為0；HPV16病毒檢出率在乳腺癌標本為42.22%(38/90)，乳腺纖維瘤標本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。
　　2.感染EBV的乳腺癌組織標本中，EBV陽性細胞率在浸潤性導管癌為(29.73±0.51)%，浸潤性小葉癌為(28.14±0.65)%，原位癌為(51.11±0.68)%，原位癌組的

10、 EBV陽性細胞率顯著高于其他兩種病理類型的乳腺癌組；感染HPV16的乳腺癌組織標本中，HPV16陽性細胞率在浸潤性導管癌為(29.78±0.38)%，浸潤性小葉癌為(28.31±0.53)%，原位癌為(51.83±0.65)%，原位癌組的HPV16陽性細胞率顯著高于其他兩種病理類型的乳腺癌組。
　　3. q-PCR結(jié)果顯示：EBV病毒檢出率在乳腺癌標本中為43.33%(39/90)，乳腺纖維瘤標本及正常乳腺組織均為0；HPV16

11、病毒檢出率在乳腺癌標本為44.44%(40/90)，乳腺維瘤標本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。在不同病理類型乳腺癌中，EBV和HPV16的病毒檢出率無顯著差異。
　　4.熒光原位雜交結(jié)果顯示：EBV病毒檢出率在乳腺癌標本中為43.33%(39/90)，
　　乳腺纖維瘤標本及正常乳腺組織均為0；HPV16病毒檢出率在乳腺癌標本為41.11%(37/90)，乳腺維瘤標本為5%(1/20)，正常乳腺組織為0。在不同病理類型

12、乳腺癌中，EBV及HPV16的病毒檢出率無顯著差異。
　　5.免疫組化、q-PCR以及熒光原位雜交3種方法對乳腺癌標本EBV及HPV16的檢出率不具有顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1. EBV及 HPV16兩種病毒在不同類型的乳腺癌組織中都有一定的檢出率，提示我們EBV和HPV16感染可能與乳腺癌的發(fā)生相關(guān)，但是與發(fā)生乳腺癌的病理類型無關(guān)。
　　2. EBV和HPV16的主要感染部位為乳腺上皮細胞的細胞核，提示我們