鴨源巴氏桿菌、大腸桿菌二聯(lián)多價蜂膠滅活疫苗研制及其免疫應答反應的動態(tài)研究.pdf

1、本研究選取鴨致病性大腸桿菌(E.coli)常見血清型Ol，02，018，078和三株分離自發(fā)病鴨場，毒力強、免疫原性好的巴氏桿菌釁加D22，D23,D157作為制苗菌株，分別以5％血瓊脂培養(yǎng)基和馬丁瓊脂培養(yǎng)基進行固體表面培養(yǎng)制備抗原，與蜂膠佐劑高速乳化，制備鴨源多殺性巴氏桿菌、大腸桿菌二聯(lián)多價蜂膠滅活疫苗。通過對供試鴨的攻毒保護試驗、用ELISA方法對供試鴨特異性抗體消長規(guī)律的研究以及用MTT法對供試鴨外周血T淋巴細胞免疫水平的檢測三個

2、方面對此疫苗的安全性、免疫原性進行了研究。 安全性檢驗及最佳免疫劑量篩選結(jié)果表明，疫苗安全可靠，疫苗最佳免疫劑量為4.2x109CFtJ/mL,0.5mI～(Ecoli約84億CF[J，只M約63億CFL7)，在4℃可保存12個月。 攻毒保護試驗結(jié)果表明，雛鴨首免后第14d時，一次免疫組對Ecoli、PM的攻毒保護率分別為100％、90％，二免后第14d時，二次免疫組可產(chǎn)生堅強免疫力，攻毒保護率均為100％。 本

3、研究采用鴨巴氏桿菌、大腸桿菌全菌裂解抗原為包被抗原，建立檢測PME.coli滅活疫苗免疫后的鴨血清中特異性抗體的ELISA方法。確定了巴氏桿菌抗原最佳包被濃度：D22-11燼/mL，D23:171～g/mI_，，D157：161～g/mL，混合裂解抗原：14.7～1多'mL，HRP"羊抗鴨IgG的最佳濃度為0.251～g/mL；大腸桿菌抗原最佳包被濃度：01:18.86ag/n～，，02:16.76gg/mI，，018:17.43gg/

4、mI。078:16.321～g/mL，混合裂解抗原：20gg/mL，HRP.羊抗鴨IgG’的最佳濃度為0.51～粵mL。 免疫鴨抗體消長規(guī)律檢測結(jié)果表明，雛鴨免疫3d后，免疫組四個血清型.E.coli抗體水平均極顯著(P＜0.01)高于空白對照組，二次免疫組抗體水平顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于一次免疫組，首免后20d左右抗體水平達到高峰，然后逐漸下降，到第54d時抗體水平仍顯著高于首免后第9d相應組抗體水平，

5、與第13d抗體水平相當；免疫組三株PM抗體水平均極顯著(P＜0.01)高于空白對照組，二次免疫組抗體水平顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于一次免疫組，首免后20d左右抗體水平達到高峰，然后逐漸下降，到第54d時抗體水平仍高于首免后第13d相應組抗體水平或相當。 T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗結(jié)果表明，.E,.coli-P.肘二聯(lián)蜂膠疫苗免疫雛鴨外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平在首免后極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)高于對照組