鴨坦布蘇病毒、鴨源大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌三聯(lián)苗的研制.pdf

1、鴨坦布蘇病毒、鴨源大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌三種都是近年來在我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)中廣泛流行的病原菌，它們與各種病菌在臨床上常以混合感染的形式出現(xiàn)，給養(yǎng)鴨業(yè)的經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的損失。為了預(yù)防鴨坦布蘇病毒病、大腸桿菌病和鴨疫，此次研究首次利用實(shí)驗(yàn)室所保存的鴨坦布蘇病毒GDNS2010.1株、一株經(jīng)鑒定血清型為O1的鴨源大腸桿菌和一株經(jīng)鑒定血清型為Ⅱ型的鴨疫里默氏桿菌，作為抗原研制了鴨坦布蘇病毒、鴨源大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌的三聯(lián)滅活疫苗。具體研究?jī)?nèi)容如下

2、：
　　1鴨坦布蘇病毒GDNS2010.1株、鴨源大腸桿菌O1株和鴨疫里默氏桿菌Ⅱ型的鑒定分析
　　鴨坦布蘇病毒GDNS2010.1株經(jīng)鴨胚傳代穩(wěn)定后作為抗原，病毒尿囊液按照Reed-Muench法測(cè)得病毒為102.68 ELD50/0.2mL。鴨源大腸桿菌經(jīng)麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)、革蘭氏染色、生化試驗(yàn)、16srRNA測(cè)序及血清型試驗(yàn)等方法鑒定為O1株。測(cè)得該菌株最小致死量（MLD）為0.2mL1×107CFU/mL。通過測(cè)定大

3、腸桿菌在TSB生長(zhǎng)曲線可知，當(dāng)培養(yǎng)10h，活菌數(shù)達(dá)到最大濃度為1.1×1010CFU/mL，OD600為0.115。
　　鴨疫里默氏桿菌經(jīng)TSA血清平板培養(yǎng)、革蘭氏染色、生化試驗(yàn)、16srRNA測(cè)序、鴨疫里默氏桿菌Ⅱ型檢測(cè)引物測(cè)序和血清型試驗(yàn)鑒等方法定為鴨疫里默氏桿菌Ⅱ型。測(cè)得該菌株最小致死量（MLD）為0.5mL×107CFU/mL通過測(cè)定鴨疫里默氏桿菌在TSB生長(zhǎng)曲線可知，當(dāng)培養(yǎng)18h，活菌數(shù)達(dá)到最大濃度為9.8×1010CF

4、U/mL，OD600為0.115。
　　2鴨坦布蘇病毒、鴨源大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌Ⅱ型三聯(lián)苗的研制與免疫保護(hù)
　　鴨坦布蘇病毒、鴨源大腸桿菌分別經(jīng)0.2％甲醛24h滅活，和鴨疫里默氏桿菌經(jīng)0.4%甲醛24h滅活，以1:1:1的比例混勻作為水相，然后與油相以2:3的比例乳化成三聯(lián)油苗。油苗經(jīng)過物理性狀檢測(cè)和無菌檢驗(yàn)后，進(jìn)行了安全性試驗(yàn)和免疫試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)疫苗對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物安全可靠，對(duì)麻鴨具有一定的保護(hù)作用。本研究還對(duì)該三聯(lián)滅活油

5、苗的免疫程序進(jìn)行探索，將麻鴨分成一免、二免、三免，三組，分別在不同時(shí)期對(duì)鴨子進(jìn)行免疫和攻毒，并采血,運(yùn)用中和抗體方法和 ELISA方法檢測(cè)鴨坦布蘇病毒抗體水平、用微量凝集試驗(yàn)方法測(cè)鴨大腸桿菌抗體水平和鴨疫里默氏桿菌抗體水平。檢測(cè)顯示：鴨坦布蘇病毒中和抗體效價(jià)在二免21天產(chǎn)生高峰為1:70.79，在三免14天后產(chǎn)生最高的抗體中和效價(jià)為1:77.62，抗體中和效價(jià)之后開始下降。麻鴨免疫坦布蘇病毒在一免二免中各時(shí)期的血清ELSA檢測(cè)均呈現(xiàn)陰性

6、，在三免21d時(shí)為陽(yáng)性，且可持續(xù)。麻鴨免疫后鴨大腸桿菌一免后30天的時(shí)候產(chǎn)生較高抗體平均效價(jià)6.76 log2。麻鴨在一免后21天進(jìn)行第二次免疫，抗體在免疫后14天達(dá)到抗體水平高峰為8.33log2之后可以維持較高的抗體水平。鴨疫里默氏桿菌在二免30天后抗體平均效價(jià)達(dá)到最高峰為9.00 log2，三免麻鴨在21天后到達(dá)抗體平均效價(jià)最高水平9.00 log2，之后可以維持較高的抗體水平。攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示：三免麻鴨可以對(duì)鴨大腸桿菌和鴨疫里默