水貂肺炎病原菌的檢測及綠膿桿菌多價滅活疫苗的制備與免疫研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：S15519學(xué)位論文水貂肺炎病原菌的檢測及綠膿桿菌多價滅活疫苗的制備與免疫研究指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：孟洋張彥龍副教授東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：生理學(xué)2015年4月論文答辯日期：2015年6月東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：2015年6月答辯委員會主席：論文評閱人：素夕厶彬素大學(xué)摘要摘要水貂細菌性肺炎是困擾水貂養(yǎng)殖業(yè)的難題，為了調(diào)查引起該病的主要病原菌并探索安全有效的防治方法，2011

2、年至2013年，對從山東、遼寧兩省送檢的水貂肺炎病例進行病原菌分離，共分離到38株細菌，結(jié)合生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定方法，最終確定包括3l株綠膿桿菌，4株肺炎克雷伯氏菌，1株臭鼻克雷伯氏菌，1株產(chǎn)酸克雷伯氏菌和1株與綠膿桿菌混合感染的鮑曼不動桿菌。綠膿桿菌包括三個血清型G型(22／31)、C型(6／31)、B型(3／31)，G型為主要流行血清型。藥敏試驗結(jié)果顯示所分離到的38株肺炎病原菌均對亞胺培南和美洛培南敏感，對氨芐青霉素和阿莫西林

3、／克拉維酸耐藥。所有分離到的病原菌均對小鼠有較強致病性。取綠膿桿菌G、C、B血清型各一株，做標(biāo)準(zhǔn)抗原，并免疫家兔，采集血清做標(biāo)準(zhǔn)抗體，通過方陣凝集試驗確定標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體最適反應(yīng)濃度。將分離到的綠膿桿菌菌株免疫小鼠，采集血清，利用標(biāo)準(zhǔn)抗原檢測免疫后小鼠血清效價，最終篩選了PAL14(G型)、PAL05(B型)、PAL06(C型)三株免疫原性較好的菌株作為疫苗候選菌株。以終濃度為O3％甲醛，經(jīng)37℃、24h對菌液進行滅活處理。疫苗包含9109

4、CFU／mL的G型和B型綠膿桿菌，6109CFU／mL的C型綠膿桿菌，配以20％鋁膠佐劑，O01％的硫柳汞，免疫健康無抗體的水貂進行抗體效價跟蹤，結(jié)果顯示免疫水貂在半月內(nèi)機體可產(chǎn)生較高水平的抗體，該抗體水平可維持3個月，滿足了在綠膿桿菌出血性肺炎流行季節(jié)對水貂的保護要求，大規(guī)模動物免疫回訪結(jié)果顯示，疫苗速發(fā)接種反應(yīng)發(fā)生率低，預(yù)后良好，對預(yù)防接種和發(fā)病后緊急接種，均具有較好的保護性。關(guān)鍵詞水貂；肺炎病原菌；藥敏試驗；綠膿桿菌；多價滅活疫苗