水貂肺炎病原菌的檢測及綠膿桿菌多價(jià)滅活疫苗的制備與免疫研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號：S15519學(xué)位論文水貂肺炎病原菌的檢測及綠膿桿菌多價(jià)滅活疫苗的制備與免疫研究指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：孟洋張彥龍副教授東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：生理學(xué)2015年4月論文答辯日期：2015年6月東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：2015年6月答辯委員會主席：論文評閱人：素夕厶彬素大學(xué)摘要摘要水貂細(xì)菌性肺炎是困擾水貂養(yǎng)殖業(yè)的難題，為了調(diào)查引起該病的主要病原菌并探索安全有效的防治方法，2011

2、年至2013年，對從山東、遼寧兩省送檢的水貂肺炎病例進(jìn)行病原菌分離，共分離到38株細(xì)菌，結(jié)合生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定方法，最終確定包括3l株綠膿桿菌，4株肺炎克雷伯氏菌，1株臭鼻克雷伯氏菌，1株產(chǎn)酸克雷伯氏菌和1株與綠膿桿菌混合感染的鮑曼不動桿菌。綠膿桿菌包括三個血清型G型(22／31)、C型(6／31)、B型(3／31)，G型為主要流行血清型。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示所分離到的38株肺炎病原菌均對亞胺培南和美洛培南敏感，對氨芐青霉素和阿莫西林

3、／克拉維酸耐藥。所有分離到的病原菌均對小鼠有較強(qiáng)致病性。取綠膿桿菌G、C、B血清型各一株，做標(biāo)準(zhǔn)抗原，并免疫家兔，采集血清做標(biāo)準(zhǔn)抗體，通過方陣凝集試驗(yàn)確定標(biāo)準(zhǔn)抗原抗體最適反應(yīng)濃度。將分離到的綠膿桿菌菌株免疫小鼠，采集血清，利用標(biāo)準(zhǔn)抗原檢測免疫后小鼠血清效價(jià)，最終篩選了PAL14(G型)、PAL05(B型)、PAL06(C型)三株免疫原性較好的菌株作為疫苗候選菌株。以終濃度為O3％甲醛，經(jīng)37℃、24h對菌液進(jìn)行滅活處理。疫苗包含9109

4、CFU／mL的G型和B型綠膿桿菌，6109CFU／mL的C型綠膿桿菌，配以20％鋁膠佐劑，O01％的硫柳汞，免疫健康無抗體的水貂進(jìn)行抗體效價(jià)跟蹤，結(jié)果顯示免疫水貂在半月內(nèi)機(jī)體可產(chǎn)生較高水平的抗體，該抗體水平可維持3個月，滿足了在綠膿桿菌出血性肺炎流行季節(jié)對水貂的保護(hù)要求，大規(guī)模動物免疫回訪結(jié)果顯示，疫苗速發(fā)接種反應(yīng)發(fā)生率低，預(yù)后良好，對預(yù)防接種和發(fā)病后緊急接種，均具有較好的保護(hù)性。關(guān)鍵詞水貂；肺炎病原菌；藥敏試驗(yàn)；綠膿桿菌；多價(jià)滅活疫苗