人類不同原核數(shù)目受精卵中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎的策略研究.pdf

1、第一章：目的：通過(guò)對(duì)正常原核數(shù)目的受精卵進(jìn)行原核評(píng)級(jí)，在體外受精-胚胎移植治療中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎。
　　 方法：回顧性分析本院2003年5月-2003年12月，采用聯(lián)合評(píng)級(jí)篩選胚胎進(jìn)行移植的434個(gè)周期，共2714個(gè)正常原核數(shù)目受精卵。根據(jù)受精卵原核發(fā)育是否同步，分為原核發(fā)育同步組和原核發(fā)育不同步組，觀察不同原核等級(jí)受精卵的發(fā)育潛力。移植胚胎的選擇首先根據(jù)胚胎發(fā)育速度及形態(tài)評(píng)級(jí)，其次根據(jù)原核評(píng)級(jí)時(shí)的等級(jí)。根據(jù)移植胚胎中是否含有原

2、核發(fā)育同步組的胚胎，統(tǒng)計(jì)比較妊娠率和著床率。
　　 結(jié)果：在2714個(gè)正常原核數(shù)目受精卵中，原核發(fā)育同步的受精卵1774個(gè)，其中優(yōu)質(zhì)胚胎(≥6細(xì)胞，形態(tài)評(píng)級(jí)為Ⅰ級(jí)或Ⅱ級(jí))743個(gè)，優(yōu)質(zhì)胚胎率為41.9％；原核發(fā)育不同步的受精卵940個(gè)，其中優(yōu)質(zhì)胚胎319個(gè)，優(yōu)質(zhì)胚胎率為34.0％，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。有395個(gè)周期的移植胚胎中含有原核發(fā)育同步組的胚胎，妊娠率為47.9％(189/395)，著床率為27.

3、5％(273/993)；有39個(gè)周期的移植胚胎中無(wú)原核發(fā)育同步的胚胎，妊娠率為43.6％(17/39)，著床率為25.0％(21/84)。兩組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：原核評(píng)級(jí)可以有效的預(yù)測(cè)胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量，有助于從正常原核數(shù)目受精卵中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎。然而，在聯(lián)合評(píng)級(jí)時(shí)，參考原核評(píng)級(jí)并不能獲得更高的妊娠率和著床率。
　　 第二章：目的：比較來(lái)源于人類單原核受精卵的發(fā)育停滯胚胎、囊胚及人類胚胎干細(xì)胞系之間

4、的核型構(gòu)成，尋求是否能夠通過(guò)囊胚培養(yǎng)可靠地篩選出單原核受精卵來(lái)源的正常核型胚胎。
　　 方法：對(duì)單原核受精卵進(jìn)行5天的囊胚培養(yǎng)，然后使用18號(hào)、X和Y染色體熒光探針對(duì)獲得的囊胚以及發(fā)育停滯的胚胎進(jìn)行熒光原位雜交分析；單原核受精卵來(lái)源的人類胚胎干細(xì)胞系通過(guò)G顯帶技術(shù)進(jìn)行核型分析。
　　 結(jié)果：囊胚的二倍體率(74.6％)顯著高于(P<0.001)發(fā)育停滯胚胎的二倍體率(31.6％)，人類胚胎干細(xì)胞系的二倍體率(97.0％)

5、則顯著高于(P<0.01)囊胚的二倍體率；通過(guò)囊胚培養(yǎng)可以淘汰單倍體異常核型的胚胎，然而單原核受精卵來(lái)源的囊胚中仍存在著嵌合體和單體等異常核型，單原核受精卵來(lái)源的人類胚胎干細(xì)胞系中存在三體異常核型。
　　 結(jié)論：通過(guò)對(duì)單原核受精卵進(jìn)行囊胚培養(yǎng)可以有效的篩選出正常核型的優(yōu)質(zhì)胚胎；并有效的淘汰異常核型胚胎，尤其是單倍體異常核型胚胎。不過(guò)囊胚培養(yǎng)并不能可靠的淘汰嵌合體和非整倍體等異常核型。
　　 第三章：目的：分析比較去除多余

6、原核后三原核受精卵來(lái)源胚胎和完整三原核受精卵來(lái)源胚胎的核型構(gòu)成，檢驗(yàn)?zāi)芊裢ㄟ^(guò)結(jié)合去除多余原核和囊胚培養(yǎng)可靠的篩選出三原核受精卵來(lái)源的恢復(fù)正常核型的胚胎。并嘗試?yán)萌コ嘤嘣撕笕耸芫褋?lái)源的囊胚建立人類胚胎干細(xì)胞系。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)組中的三原核受精卵通過(guò)顯微操作去除多余原核后進(jìn)行5—6天的囊胚培養(yǎng)；未去除多余原核的三原核受精卵行囊胚培養(yǎng)作為對(duì)照組。用17號(hào)、X和Y染色體探針對(duì)兩組的胚胎進(jìn)行熒光原位雜交分析核型。實(shí)驗(yàn)組中囊胚

7、的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)用于胚胎干細(xì)胞建系，對(duì)建立的細(xì)胞系進(jìn)行干細(xì)胞特性鑒定。使用G顯帶方法進(jìn)行核型分析，并通過(guò)DNA指紋分析干細(xì)胞的染色體組是否遺傳自雙親。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組的囊胚形成率為13.5％，顯著高于(P<0.05)對(duì)照組的囊胚形成率(8.7％)。實(shí)驗(yàn)組胚胎的三倍體率(5.7％)顯著低于(P<0.01)對(duì)照組的三倍體率(19.4％)。實(shí)驗(yàn)組囊胚的二倍體率(55.0％)顯著高于(P<0.05)實(shí)驗(yàn)組發(fā)育阻滯胚胎的二倍體率(18.4％