Apoptin基因轉入人類胰腺癌細胞誘導細胞凋亡的研究.pdf

1、隨著經濟的飛速發(fā)展，胰腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前，胰腺癌位居腫瘤死因第4位，由于起病隱匿，侵襲性強，又缺乏有效的早期診斷方法，確診時往往已屬晚期，診斷后中位生存期不到6個月，其5年生存率僅1%-5%，是預后最差的腫瘤之一。傳統(tǒng)的手術治療、放療、化療等治療方法存在各自的局限性。 近年來，隨著分子生物學研究的飛速發(fā)展，細胞生長、分化、凋亡的機制逐漸被認識，研究發(fā)現多細胞生物通過細胞增殖與凋亡（Apoptosis）來維持自身穩(wěn)定

2、，如若兩者失衡，則可能導致腫瘤的發(fā)生。通過誘導細胞凋亡來治療腫瘤是可以考慮的，將成為治療腫瘤的一個新途徑。國外新近報道的一種小分子蛋白——來自雞貧血病毒的凋亡素（Apoptin）具有潛在的應用價值。凋亡素與其它凋亡相關蛋白不同的是，它能夠選擇性地誘導腫瘤細胞和轉化細胞凋亡而不殺傷人和鼠的正常二倍體細胞，且無毒副作用，因此可作為候選抗腫瘤制劑，具有很好的應用前景。 目的: 觀察pEGFP-Apoptin基因轉入人胰腺癌細胞

3、株PANC-1后，EGFP-A poptin融合蛋白在PANC-1細胞中的分布和亞細胞定位，以及EGFP-A poptin融合蛋白對腫瘤細胞的誘導凋亡效應，探討Apoptin在體外誘導腫瘤細胞凋亡的機制。 研究方法: 利用脂質體轉染技術將構建的EGFP-Apoptin融合蛋白真核表達載體導入人胰腺癌細胞株PANC-1中，在熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡下觀察EGFP-Apoptin融合蛋白在腫瘤細胞中的分布、亞細胞定位；用

4、Annexin V-APC/PI雙染法檢測其在體外誘導腫瘤細胞凋亡的效應。 結果: pEGFP-Apoptin被成功轉染入胰腺癌細胞株PANC-1，并可見其EGFP-Apoptin融合蛋白在細胞核中表達。EGFP-Apoptin組細胞在各檢測時間點凋亡率明顯高于空白對照組、C2組和Lipo組。 結論: EGFP-Apoptin融合蛋白在胰腺癌細胞株PANC-1中具有核定位效應，可以作為研究Apopti