STAT3-siRNA對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的干涉作用.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文STAT3siRNA對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的干涉作用姓名：史娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：呼文亮陳立軍20070301中文摘要siRNA表達(dá)盒。凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物片段大小，回收純化后，自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序分析所得產(chǎn)物的序列是否與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相同。4轉(zhuǎn)染細(xì)胞參照轉(zhuǎn)染試劑的操作說(shuō)明，將靶向于STAT3基因的siRNA表達(dá)盒轉(zhuǎn)染至人結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞與人成纖維細(xì)胞中，同時(shí)設(shè)立人成纖維對(duì)照組、SW480對(duì)

2、照組、SW480空轉(zhuǎn)染試劑組、SW480錯(cuò)配鏈SECs組。5觀察細(xì)胞形態(tài)變化轉(zhuǎn)染后48小時(shí)于倒置光顯微鏡下觀察細(xì)胞表象變化；再取轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行Hoechst33342／PI雙染后置于熒光顯微鏡下觀察其形態(tài)學(xué)變化。6RTPCR(RTpolymerasechainreaction，逆轉(zhuǎn)錄PCR)分析STAT3mRNA的表達(dá)變化Trizol試劑分別提取轉(zhuǎn)染后48小時(shí)各組細(xì)胞的總RNA(ribonucleicacid，核糖核酸)，逆轉(zhuǎn)

3、錄生成eDNA。以eDNA為模板，擴(kuò)增人STAT3及pactin基因片段，凝膠圖像分析軟件讀取分析二維圖像，對(duì)比STAT3基因與13actin基因表達(dá)的變化情況。7流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡峰及周期變化50ml培養(yǎng)瓶接種靶細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后制成細(xì)胞懸液，經(jīng)處理后上流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果：l癌基因STAT3表達(dá)水平的檢測(cè)人成纖維細(xì)胞與人結(jié)直腸癌SW480細(xì)胞都可以檢測(cè)到在350bp處13actin基因與400bp處STAT3基因的表達(dá)；