STAT3-siRNA對結(jié)直腸癌細胞的干涉作用.pdf_第1頁
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1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文STAT3siRNA對結(jié)直腸癌細胞的干涉作用姓名：史娜申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：呼文亮陳立軍20070301中文摘要siRNA表達盒。凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物片段大小，回收純化后，自動測序儀測序分析所得產(chǎn)物的序列是否與實驗設(shè)計相同。4轉(zhuǎn)染細胞參照轉(zhuǎn)染試劑的操作說明，將靶向于STAT3基因的siRNA表達盒轉(zhuǎn)染至人結(jié)直腸癌SW480細胞與人成纖維細胞中，同時設(shè)立人成纖維對照組、SW480對

2、照組、SW480空轉(zhuǎn)染試劑組、SW480錯配鏈SECs組。5觀察細胞形態(tài)變化轉(zhuǎn)染后48小時于倒置光顯微鏡下觀察細胞表象變化；再取轉(zhuǎn)染后48小時的細胞進行Hoechst33342／PI雙染后置于熒光顯微鏡下觀察其形態(tài)學變化。6RTPCR(RTpolymerasechainreaction，逆轉(zhuǎn)錄PCR)分析STAT3mRNA的表達變化Trizol試劑分別提取轉(zhuǎn)染后48小時各組細胞的總RNA(ribonucleicacid，核糖核酸)，逆轉(zhuǎn)

3、錄生成eDNA。以eDNA為模板，擴增人STAT3及pactin基因片段，凝膠圖像分析軟件讀取分析二維圖像，對比STAT3基因與13actin基因表達的變化情況。7流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞凋亡峰及周期變化50ml培養(yǎng)瓶接種靶細胞，轉(zhuǎn)染48小時后制成細胞懸液，經(jīng)處理后上流式細胞儀分析。結(jié)果：l癌基因STAT3表達水平的檢測人成纖維細胞與人結(jié)直腸癌SW480細胞都可以檢測到在350bp處13actin基因與400bp處STAT3基因的表達；

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