環(huán)維黃楊星D對培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：研究環(huán)維黃楊星D（Cyclovirobuxine D，CVB-D）對缺氧復(fù)氧損傷所致培養(yǎng)乳鼠心肌細胞損傷的保護作用，并探討其作用機制。 方法：采用體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，制備缺氧復(fù)氧心肌細胞損傷模型。心肌細胞隨機分為四組：空白對照組（Control）；缺氧-復(fù)氧（hypoxia-reoxygenation，H/R）組將心肌細胞放入低氧（3%O2、5%CO2、92%N2）孵箱培養(yǎng)16h后轉(zhuǎn)入正常孵箱繼續(xù)培養(yǎng)4h； CVB-D組

2、在培養(yǎng)液中加入CVB-D1×10-5mol/L，繼續(xù)培養(yǎng)20h；CVB-D+H/R組，在缺氧前30min加入CVB-D1×10-5mol/L，然后缺氧16h，復(fù)氧4小時。用比色法測定培養(yǎng)液中LDH活性：硫代巴比妥酸（Thibabituric Acid TBA）法測定MDA含量；黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力；Caspase-Glo（）3/7 Reagent測定Caspase-3蛋白酶活性；流式細胞儀檢測細胞凋亡率。 結(jié)果：

3、 1.LDH活性：與Control組比較，H/R組的LDH活性明顯升高（27.2±14.2 vs97.8±13.0 U/L，P<0.01）；與H/R組相比，H/R+CVB-D組的LDH活性明顯降低（126.0±23.8 vs227.2±14.2 U/L，P<0.01）；CVB-D組與Control組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 2.凋亡率：與Control組比較，H/R組心肌細胞凋亡率明顯升高，從0.7±0.1%升高到13.2±1.1%（

4、P<0.01）；與H/R組相比，H/R+CVB-D組的細胞凋亡率顯著降低（3.0±0.3 vs13.2±1.1%，P<0.01）； CVB-D組與Control組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 3.MDA含量及SOD活力：與Control組比較H/R組培養(yǎng)上清液中MDA含量顯著增加，由0.76±0.13μmol·L-1增至3.21±0.17μmol·L-1（P<0.01），SOD活力明顯降低，由284.30±13.20 U·ml-1降至16

5、5.22±11.67 U·ml-1（P<0.01）。與H/R組相比，CVB-D預(yù)處理組可明顯降低缺氧/復(fù)氧所致MDA含量增加的程度，MDA含量為1.36±0.08μmol·L-1（P<0.01），減弱SOD活力下降的程度，SOD的活力為267.40±14.52（P<0.01）。只加CVB-D處理組無明顯變化。 4.Caspase-3活性：與Control組比較，H/R組的Caspase-3蛋白酶活性升高，從1.10±0.08升高

6、到1.42±0.07（P<0.01）；與H/R組相比，H/R+CVB-D組的Caspase-3蛋白酶活性降低（1.12±0.08 vs1.42±0.07，P<0.01）；CVB-D組與Control組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： 1.CVB-D可減輕細胞內(nèi)乳酸脫氫酶的漏出，提示CVB-D有維持心肌細胞膜完整性的作用； 2.CVB-D可以降低缺氧/復(fù)氧后心肌細胞MDA含量，提高缺氧/復(fù)氧后心肌細胞SOD活力，提示其心