還原型谷胱甘肽對缺氧-復(fù)氧培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞的干預(yù)性研究.pdf

1、目的：1.心肌缺氧/復(fù)氧損傷是多因素所致的復(fù)合性損傷，但其具體機(jī)制仍不清。本文旨在探討氧自由基在乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的作用。 2.研究表明，炎性細(xì)胞因子參與了心肌缺氧/復(fù)氧損傷，本文通過觀察炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α在乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的表達(dá)，力求顯示IL-1β和TNF-α在心肌缺氧/復(fù)氧損傷中的作用。 3.探討還原型谷胱甘肽(GSH)作為一種自由基清除劑，對缺氧/復(fù)氧培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細(xì)胞損傷的

2、保護(hù)作用。 方法：取出生1～3天的Wistar大鼠，剪取心尖部組織，將心肌剪成約0.5～1mm3大小的碎塊，用0.25％胰酶消化4～5次，收集除第一次消化后的上清液，將收集到的上清液在4℃、500r/min的速度下離心10min，棄去上清液，用平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。然后用DMEM培養(yǎng)基配制成細(xì)胞懸液。應(yīng)用差速貼壁法分離純化心肌細(xì)胞。將原代培養(yǎng)的乳鼠心室肌細(xì)胞分為正常對照組與還原型谷胱甘肽不同濃度處理組。將正常培養(yǎng)72h后的心肌細(xì)胞

3、換用缺氧缺糖DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)板放入充有99.5％N2的密閉容器中，37℃密閉培養(yǎng)2h。將缺氧的心肌細(xì)胞換用飽含95％O2+5％CO2的含糖DMEM培養(yǎng)基，正常條件下培養(yǎng)1h，建立缺氧/復(fù)氧損傷模型。缺氧、復(fù)氧前均給GSH0、40、80、160mg/L濃度，缺氧2小時，復(fù)氧1小時，在缺氧前、缺氧2小時及復(fù)氧1小時檢測培養(yǎng)液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平，在缺氧前及復(fù)氧后采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測正

4、常組、模型組及160mg/L藥物組的IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：1.與對照組相比，單純?nèi)毖?復(fù)氧(0mg/L)組細(xì)胞在缺氧及復(fù)氧后搏動活力降低，少見搏動，細(xì)胞形態(tài)皺縮變圓，大多偽足減少。隨著藥物劑量的增加，細(xì)胞搏動和形態(tài)逐漸接近于正常對照組。 2.在模型組，缺氧及復(fù)氧后，心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD活性下降、MDA水平升高(P＜0.01)，復(fù)氧1小時比缺氧2小時后差別更為明顯(P＜0.01)。復(fù)氧1

5、小時細(xì)胞內(nèi)IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達(dá)迅速增強(qiáng)(P＜0.01)。 3.GSH預(yù)處理組減輕了SOD活性的降低，在160mg/L組達(dá)到峰值(P＜0.01)，與對照組無顯著性差異(P＞0.05)。并以劑量依賴性減弱了MDA的上升。同時GSH160mg/L也降低了IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達(dá)的上調(diào)。 結(jié)論：1.在心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的過程中，氧自由基起著重要的作用。 2.炎性細(xì)胞因子IL-1

6、β和TNF-α參與了心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷，它們作為損傷因素起著協(xié)同作用。 3.還原型谷胱甘肽對缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與谷胱甘肽的抗氧化作用有關(guān)。炎性細(xì)胞因子和氧自由基的作用是相互聯(lián)系的，還原型谷胱甘肽能清除氧自由基，并能減輕IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的升高，從而保護(hù)缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞。 第二部分綜述 炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α與心肌缺血/再灌注損傷(Infla

7、mmatoryCyokineofInterleukin-1βandTumorNecrosisFactor-αandIschemia/ReperfusionmyocardialInjury) 心肌缺血/再灌注損傷是多因素所致的復(fù)合性損傷，近些年，越來越多的研究證實(shí)炎性細(xì)胞因子在缺血/再灌注損傷中具有重要的作用，IL-1β和TNF-α作為重要的細(xì)胞因子，通過誘導(dǎo)細(xì)胞黏附分子的表達(dá)、作用于心肌細(xì)胞的NO系統(tǒng)、激活NF-κB等多種途徑參