還原型谷胱甘肽對缺氧-復氧培養(yǎng)大鼠心肌細胞的干預性研究.pdf

1、目的：1.心肌缺氧/復氧損傷是多因素所致的復合性損傷，但其具體機制仍不清。本文旨在探討氧自由基在乳鼠心肌細胞缺氧/復氧損傷中的作用。 2.研究表明，炎性細胞因子參與了心肌缺氧/復氧損傷，本文通過觀察炎性細胞因子IL-1β和TNF-α在乳鼠心肌細胞缺氧/復氧損傷中的表達，力求顯示IL-1β和TNF-α在心肌缺氧/復氧損傷中的作用。 3.探討還原型谷胱甘肽(GSH)作為一種自由基清除劑，對缺氧/復氧培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細胞損傷的

2、保護作用。 方法：取出生1～3天的Wistar大鼠，剪取心尖部組織，將心肌剪成約0.5～1mm3大小的碎塊，用0.25％胰酶消化4～5次，收集除第一次消化后的上清液，將收集到的上清液在4℃、500r/min的速度下離心10min，棄去上清液，用平衡鹽溶液洗滌細胞。然后用DMEM培養(yǎng)基配制成細胞懸液。應用差速貼壁法分離純化心肌細胞。將原代培養(yǎng)的乳鼠心室肌細胞分為正常對照組與還原型谷胱甘肽不同濃度處理組。將正常培養(yǎng)72h后的心肌細胞

3、換用缺氧缺糖DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)板放入充有99.5％N2的密閉容器中，37℃密閉培養(yǎng)2h。將缺氧的心肌細胞換用飽含95％O2+5％CO2的含糖DMEM培養(yǎng)基，正常條件下培養(yǎng)1h，建立缺氧/復氧損傷模型。缺氧、復氧前均給GSH0、40、80、160mg/L濃度，缺氧2小時，復氧1小時，在缺氧前、缺氧2小時及復氧1小時檢測培養(yǎng)液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平，在缺氧前及復氧后采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測正

4、常組、模型組及160mg/L藥物組的IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達變化。 結果：1.與對照組相比，單純缺氧/復氧(0mg/L)組細胞在缺氧及復氧后搏動活力降低，少見搏動，細胞形態(tài)皺縮變圓，大多偽足減少。隨著藥物劑量的增加，細胞搏動和形態(tài)逐漸接近于正常對照組。 2.在模型組，缺氧及復氧后，心肌細胞培養(yǎng)液中SOD活性下降、MDA水平升高(P＜0.01)，復氧1小時比缺氧2小時后差別更為明顯(P＜0.01)。復氧1

5、小時細胞內IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達迅速增強(P＜0.01)。 3.GSH預處理組減輕了SOD活性的降低，在160mg/L組達到峰值(P＜0.01)，與對照組無顯著性差異(P＞0.05)。并以劑量依賴性減弱了MDA的上升。同時GSH160mg/L也降低了IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達的上調。 結論：1.在心肌細胞缺氧/復氧損傷的過程中，氧自由基起著重要的作用。 2.炎性細胞因子IL-1

6、β和TNF-α參與了心肌細胞缺氧/復氧損傷，它們作為損傷因素起著協(xié)同作用。 3.還原型谷胱甘肽對缺氧/復氧損傷的心肌細胞具有保護作用，其機制可能與谷胱甘肽的抗氧化作用有關。炎性細胞因子和氧自由基的作用是相互聯(lián)系的，還原型谷胱甘肽能清除氧自由基，并能減輕IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的升高，從而保護缺氧/復氧損傷的心肌細胞。 第二部分綜述 炎性細胞因子IL-1β、TNF-α與心肌缺血/再灌注損傷(Infla

7、mmatoryCyokineofInterleukin-1βandTumorNecrosisFactor-αandIschemia/ReperfusionmyocardialInjury) 心肌缺血/再灌注損傷是多因素所致的復合性損傷，近些年，越來越多的研究證實炎性細胞因子在缺血/再灌注損傷中具有重要的作用，IL-1β和TNF-α作為重要的細胞因子，通過誘導細胞黏附分子的表達、作用于心肌細胞的NO系統(tǒng)、激活NF-κB等多種途徑參