乳化異氟醚對乳鼠心肌細胞缺氧-復氧損傷的保護作用及凋亡相關基因表達的影響.pdf

1、目的：觀察乳化異氟醚(Emulsifled isofurane，EI，8％體積分數(shù))對培養(yǎng)乳鼠心肌細胞模擬缺血再灌注損傷后心肌細胞的保護作用，并對其可能的機制進行探討，為EI以后在臨床的研究及應用提供實驗依據(jù)。 方法：利用原代培養(yǎng)的wister乳鼠心肌細胞建立模擬心肌缺血再灌注模型，分對照組(不加藥物處理，常氧條件下培養(yǎng)6h)、模型(H/R)組(不加藥物處理，缺氧3h后復氧3h)、脂肪乳組(在培養(yǎng)基中加入脂肪乳干預2h，余同H/

2、R組)和EI組(在培養(yǎng)基中加入EI干預2h，余同H/R組)。各組心肌細胞做相應分組處理后，利用倒置顯微鏡觀察心肌細胞的生長狀態(tài)和搏動頻率，并用透射電鏡觀察細胞超微結構改變；XTT比色法測定細胞存活率；收集心肌細胞行超聲粉碎，離心取上清，按照試劑盒說明，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸顯色法測定丙二醛(MDA)含量，并測定缺氧復氧后細胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性；流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡率；RT-PCR

3、檢測心肌細胞凋亡基因bcl-2 mRNA、bax mRNA的表達；Western blot定量檢測Bcl-2、Bax蛋白的表達。 結果： 1.心肌細胞形態(tài)學觀察：心肌細胞培養(yǎng)24h出現(xiàn)自發(fā)性搏動，72h后聚集成簇，呈現(xiàn)頻率為80-100次/min的同步節(jié)律性搏動。細胞形態(tài)呈梭形或不規(guī)則三角形，偽足明顯，可發(fā)生相互融合，且其超微結構完整、清楚。H/R后心肌細胞皺縮變圓，偽足減少，細胞搏幅減弱、頻率減慢甚至出現(xiàn)停搏，超微結構

4、出現(xiàn)線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡等改變。 EI和脂肪乳組對H/R心肌細胞的形態(tài)和超微結構都有明顯改善。 2 各組心肌細胞存活率比較：與對照組比較，其余各組心肌細胞存活率均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而與H/R組比較，EI組和脂肪乳組心肌細胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 3.各組心肌細胞SOD、LDH活性與MDA含量的比較：與對照組比較，H/R組細胞SOD下降，MDA和LDH升高(均P＜0.05

5、)。EI組與H/R組比較，心肌細胞SOD活性提高，MDA和LDH含量降低(均P＜0.05)。 4 EI和脂肪乳均可顯著降低H/R損傷心肌細胞的凋亡率(均P＜0.05)，但EI組與脂肪乳組比較降低更明顯(均P＜0.05)；EI可顯著上調(diào)Bcl-2表達(P＜0.05)、下調(diào)Bax表達(P＜0.05)；脂肪乳對Bcl-2和Bax表達無影響(P＞0.05)。 結論： 1.H/R對體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞可以造成明顯的損傷，表

6、現(xiàn)為細胞存活率降低，心肌酶的漏出，氧自由基的產(chǎn)生增加，心肌細胞超微結構改變，心肌細胞凋亡率增加等。 2.乳化異氟醚對體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞H/R損傷具有保護作用，表現(xiàn)為能提高細胞存活率，減少心肌酶的漏出，抑制氧自由基產(chǎn)生，維持心肌細胞超微結構完整，抑制心肌細胞凋亡，促進復氧時心肌細胞功能的恢復等。 3.乳化異氟醚對體外培養(yǎng)乳鼠心肌細胞H/R損傷的保護作用機制可能與其抗自由基損傷、bcl-2基因表達上調(diào)和bax基因表達下調(diào)有