IL-6過表達(dá)對大腸癌細(xì)胞株凋亡的影響及其對5-FU敏感性的研究.pdf

1、目的：白介素6（IL-6）在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展中產(chǎn)生了重要作用。因此，本實驗通過電轉(zhuǎn)染白介素6基因來使大腸癌Lovo細(xì)胞中的白介素6過表達(dá)，探討白介素6對大腸癌Lovo細(xì)胞增殖與凋亡的影響，用MTT法檢測白介素6基因過表達(dá)Lovo細(xì)胞株對5氟尿嘧啶(5-Fu)的敏感性。
　　方法：實驗分為3組：正常 Lovo細(xì)胞組、空載質(zhì)粒 Lovo細(xì)胞組、過表達(dá)質(zhì)粒Lovo細(xì)胞組。1）建立白介素6基因過表達(dá)Lovo細(xì)胞株：通過采用分子克隆技術(shù)將

2、白介素6基因插入表達(dá)載體 pECFP-N1的克隆位點之間，獲得重組質(zhì)粒 IL-6-pECFP-N1，通過 DNA測序鑒定陽性質(zhì)粒，以電穿孔轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒 IL-6-pECFP-N1導(dǎo)入受體Lovo細(xì)胞中，獲取白介素6基因過表達(dá)Lovo細(xì)胞株。2）用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測白介素6蛋白的含量來判斷三組細(xì)胞白介素6的表達(dá)情況。3）轉(zhuǎn)導(dǎo) Lovo細(xì)胞株細(xì)胞凋亡檢測：用7-AAD/PE-Annexin V染色法流式細(xì)胞術(shù)檢測12h

3、、36h、72h三個時間點各細(xì)胞株的凋亡或存活情況。4）MTT檢測不同濃度（20ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml）的5-氟尿嘧啶處理各組細(xì)胞株后12h、36h、72h三個時間點的細(xì)胞增殖抑制情況。
　　結(jié)果：
　　1）測序結(jié)果顯示成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒 IL-6-pECFP-N1。
　　2）酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測白介素6蛋白的含量：白介素6蛋白在三組細(xì)胞中都有不同水平的表達(dá)，在白

4、介素6基因過表達(dá) Lovo細(xì)胞株中表達(dá)水平最高，且含量明顯高于正常 Lovo細(xì)胞組、空載質(zhì)粒 Lovo細(xì)胞組，而正常 Lovo細(xì)胞組與空載質(zhì)粒 Lovo細(xì)胞組白介素6的含量差別無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3）7-AAD/PE-Annexin V染色法流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明白介素6基因過表達(dá) Lovo細(xì)胞組細(xì)胞存活量明顯高于正常 Lovo細(xì)胞組細(xì)胞存活量與空載質(zhì)粒Lovo細(xì)胞組細(xì)胞存活量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而正常Lovo細(xì)胞組細(xì)胞存活量與空

5、載質(zhì)粒Lovo細(xì)胞組細(xì)胞存活量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4）MTT檢測結(jié)果顯示5-氟尿嘧啶對各組細(xì)胞增殖均有抑制作用，抑制率呈時間-濃度依賴性。而三組間白介素6過表達(dá)Lovo細(xì)胞組的增殖抑制率明顯高于正常 Lovo細(xì)胞組與空載質(zhì)粒 Lovo細(xì)胞組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，正常 Lovo細(xì)胞組與空載質(zhì)粒 Lovo細(xì)胞組的增殖抑制率無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1）成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒 IL-6-pECFP-N1，通過電轉(zhuǎn)染重組質(zhì)