小鼠角膜創(chuàng)傷修復的分子機制.pdf

1、目的：創(chuàng)建小鼠角膜創(chuàng)傷修復的動物模型；研究小鼠角膜創(chuàng)傷修復過程中基因表達譜的變遷；觀察細胞增殖和纖維化調節(jié)因子在創(chuàng)傷修復早期的動態(tài)變化。 方法： 1.創(chuàng)建動物模型 以三種創(chuàng)傷方式制作小鼠角膜穿通傷動物模型，臨床評分確定重復性高，再現性好的動物模型。行HE染色和免疫組化評價角膜創(chuàng)傷修復的過程。 2.應用基因表達芯片研究小鼠角膜創(chuàng)傷修復過程中基因表達譜的變遷 收集傷后3d和14d的小鼠角膜，分別與正常

2、角膜進行芯片雜交。讀取數據后，分析差異表達基因的表達譜和特點。 3.觀察細胞增殖和纖維化調節(jié)因子在小鼠角膜創(chuàng)傷修復早期的動態(tài)變化 收集正常時及傷后6h，24h，72h的小鼠角膜，行RT-PCR，觀察TGF-β2、CTGF、G0/G1開關基因2的變化，該實驗同時是對基因芯片數據的驗證。 結果： 1.三種創(chuàng)傷方式中三棱針角膜中央穿刺是重復性和再現性最好。 2.角膜創(chuàng)傷后3d和15d差異性表達基因共29

3、7個，以下調基因為主。細胞骨架/細胞外基質是主要的差異性表達基因類別之一，肌球蛋白、絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑、視黃醇結合蛋白4等基因下調10倍以上。 3.TGF-β2、CTGF、G0/G1開關基因2在傷后24h一過性增高，之后下調。 結論： 1.三棱針角膜中央穿刺法可成功制作角膜創(chuàng)傷修復的動物模型。 2.基因芯片實驗結果提示，小鼠角膜創(chuàng)傷修復調控因子的研究方向是大量未知功能或未被涉及的基因。