封閉MHC-I基因?qū)κ驦AK細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文封閉MHC-I基因?qū)κ驦AK細(xì)胞殺傷活性的影響姓名：?jiǎn)螌帉幧暾?qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：鄒雄20040515山東火學(xué)碩士學(xué)位論文封閉M H C ～l 基因?qū)κ驦 A K 細(xì)胞殺傷活性的影響山東大學(xué)齊魯醫(yī)院檢驗(yàn)科碩士研究生單寧寧導(dǎo)師鄒雄教授中文摘要目的：觀(guān)察使用反義寡核苷酸( a n t i s e n s eo l i g o n u c l e o t i d e s ，A S O N ) 及小干

2、擾短鏈R N A ( s m a l li n t e r f e r n c eR N A ，s i R N A ) 封閉B A L B ／c 小鼠淋巴細(xì)胞M H C —I基因( H 一2 K 6 ) 對(duì)H2 K 。表達(dá)的影響及H 一2 K d 表達(dá)降低的淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞( t y m p h o k i n e a c t i v a t e dk i l l e rc e l l ，L A K ) 殺傷活性的改變，探討淋巴細(xì)

3、胞M H C —I 在腫瘤免疫中的作用。方法：無(wú)菌制備B A I ，B ／c 小鼠脾淋巴細(xì)胞，由白介素一2 誘導(dǎo)為L(zhǎng) A K 細(xì)胞。在J×1 0 9 幾的L A K 細(xì)胞中分別加入5 ，1 0 ，1 5 ，2 0 ，2 5 pm o l ／L 的H 一2 K t A S O N 和2 0um o l ／1 的錯(cuò)義寡核苷酸，在4 X 1 0 。幾的L A K 細(xì)胞的2 4 孔培養(yǎng)板中分別加入I I 2 K 8 s i R N k

4、 ，單純轉(zhuǎn)染劑和無(wú)義s i R N A 。免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)A S O N和s i R N A 對(duì)L A K 細(xì)胞H 一2 K d 表達(dá)抑制作用，M T T 法和L D H 釋放試驗(yàn)檢測(cè)H 一2 K d 表達(dá)降低的L A K 細(xì)胞腫瘤殺傷括性。結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果顯示：A S O N ( 1 5 u m o l ／1 ) 組H - 2 K d 蛋白的表達(dá)率由9 0 ．1 ±4 ．4 ％下降至7 9 ．8 ±

5、;2 ．5 ％( P < O ．叭) ，M T T 法檢測(cè)( E ／T = 7 5 ／1 ) H - 2 K 。降低的L A K 細(xì)胞對(duì)K 5 6 2 的殺傷活性由8 2 ．3 ±3 ，1 ％降到6 0 ．2 ±6 ．7 ％( 尺O ．0 1 ) ，對(duì)H 2 2 細(xì)胞株的殺傷活性由6 7 ．4 ±2 ．8 ％降到5 3 ．2 ±8 ．1 ％( P < O ．0 1 ) 。L D H 釋

6、放試驗(yàn)顯示( E ／T = 4 0 ／1 ) ：對(duì)H 2 2 腫瘤細(xì)胞的殺傷活性由8 1 ．6 ±5 ．9 ％降低到7 0 ．8 ±2 ．2 ％( P < 0 ．0 1 ) 。s i R N A 組( s i R N k ／T r a n s M e s s e n g e r ：1 ．6 拋／8 蛆) H 一2 K d 蛋白的表達(dá)率由9 0 ．1±4 ．4 ％下降至4 0 ．5 ±5 ．4

7、 ％( 尺O ．0 1 ) ，M T T 法檢測(cè)( E ／T = 7 5 ／1 ) 對(duì)K 5 6 2 的殺傷活性由8 2 ．3 + B ．1 ％降到3 8 ．9 ±6 ．5 ％( 只O ．0 1 ) ，對(duì)H 2 2 細(xì)胞株的殺傷活性由6 7 ．4 ±2 ．8 ％降到4 6 ．9 - - + 4 ．6 ％( P ( O ．0 1 ) 。L D H 釋放試驗(yàn)顯示( E ／T 2 4 0 ／1 ) ：對(duì)H 2 2 腫瘤細(xì)胞