飼料添加劑共軛亞油酸生物合成研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid, CLA)是一種人體自身無(wú)法合成但是具有重要的保健作用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一種脂肪酸，近年來(lái)利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)其生理功能做了廣泛的研究，包括抗腫瘤、減肥、提高免疫力等生理功能。CLA也是非常有應(yīng)用前景的飼料添加劑，能夠增加動(dòng)物肌肉組織，減少脂肪含量;生產(chǎn)富含CLA的動(dòng)物產(chǎn)品如牛奶、禽蛋等;提高動(dòng)物免疫力，減少抗生素的使用。自然界存在的共軛亞油酸只在反芻動(dòng)物肉、奶、及其制品中找到，且含量有

2、限?；瘜W(xué)生產(chǎn)方法產(chǎn)物不單一，而且混有副產(chǎn)物。因此本實(shí)驗(yàn)希望通過(guò)生物方法得到一種生物酶，可以在適宜的條件下催化富含亞油酸的紅花籽油得到共軛亞油酸，為大規(guī)模生產(chǎn)CLA用于飼料添加劑提供基礎(chǔ)。本研究共分為以下三個(gè)部分:
　　共軛亞油酸檢測(cè)方法建立。一是分光光度計(jì)法，利用共軛亞油酸的共軛雙鍵在233nm下有吸收值，而亞油酸沒(méi)有;另一種是氣相色譜（氣質(zhì)聯(lián)用）法，根據(jù)脂肪酸鏈的長(zhǎng)度和不飽和度進(jìn)行分離。
　　菌株的構(gòu)建和發(fā)酵條件探索;通過(guò)

3、查找蛋白晶體結(jié)構(gòu)，找到了一種來(lái)源于痤瘡丙酸桿菌的可以生產(chǎn)單一共軛亞油酸（trans-10，cis-12CLA）的亞油酸異構(gòu)酶，酶基因由上海捷瑞公司合成，選用大腸桿菌作為轉(zhuǎn)化子，通過(guò)構(gòu)建載體和轉(zhuǎn)化體，獲得了一種可以生產(chǎn)單一結(jié)構(gòu)的共軛亞油酸的大腸桿菌。通過(guò)亞油酸異構(gòu)酶的發(fā)酵條件研究，確定了發(fā)酵底物濃度為1‰LA和1‰輔酶FAD。最適反應(yīng)溫度在40℃左右，pH6.7左右，在此條件下亞油酸異構(gòu)酶保持最高的活性;
　　雙酶聯(lián)用催化體系的建立