乳桿菌生物制備共軛亞油酸的研究.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一種由亞油酸(Linoleic acid，LA)轉(zhuǎn)化而來的一系列十八碳二烯脂肪酸的總稱，其中c9，t11-CLA和t10，c12-CLA兩種構(gòu)型具有重要的生理功能，在提高人體免疫力、抗癌、防止動脈粥樣硬化、抗氧化等方面都具有良好的效果，因而在醫(yī)藥、食品添加劑和保健品行業(yè)中都有廣泛應(yīng)用。
　　本論文篩選得到一株CLA生產(chǎn)能力較強(qiáng)的菌株，并通過低溫等離子體誘變、培

2、養(yǎng)基優(yōu)化、發(fā)酵條件優(yōu)化和細(xì)胞高密度培養(yǎng)等方面研究以提高原始菌株的產(chǎn)量，論文主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.從市售酸奶，鮮牛奶，東北酸菜，四川泡菜以及污水處理廠的活性污泥中篩選出四株CLA產(chǎn)生菌，其中，從東北酸菜汁中篩選出的SC-05產(chǎn)量最高，特別是GC結(jié)果表明，SC-05合成的CLA產(chǎn)物構(gòu)型為單一構(gòu)型，為c9，t11-CLA。
　　2.通過對菌株SC-05的16S rDNA序列測序及分析，發(fā)現(xiàn)與乳桿菌屬（Lactobaci

3、llus）親緣關(guān)系最近，相似性達(dá)到99％，鑒定并命名為Lactobacillus sp.SC-05。
　　3.將Lactobacillus sp.SC-05作為出發(fā)菌株，利用低溫等離子技術(shù)對其進(jìn)行誘變處理。誘變處理后，經(jīng)過發(fā)酵實(shí)驗(yàn)篩選到四株正突幅度大于20％菌株，其中A-08具有較好的遺傳穩(wěn)定性，且產(chǎn)量較高，達(dá)到119.24μg/mL，比出發(fā)菌株增加了83.00％。
　　4.通過正交實(shí)驗(yàn)對誘變菌株A-08發(fā)酵培養(yǎng)基中的成分比

4、例進(jìn)行優(yōu)化，采用單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面法(RSM)法對發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。確定最佳培養(yǎng)基成分含量為:葡萄糖3％，蛋白胨0.5％，牛肉膏2％，酵母膏2％，檸檬酸氫二銨0.2％，乙酸鈉0.3％，磷酸氫二鉀0.2％，硫酸鎂0.02％，硫酸錳0.02％。最適發(fā)酵工藝條件為:采用限氧搖瓶發(fā)酵，37℃培養(yǎng)44.67h，初始pH值為6.5，接種量為2％，發(fā)酵培養(yǎng)液中LA濃度為3.76 mg/mL。CLA的產(chǎn)量由優(yōu)化前的119.24μg/mL提高到196.2