水稻穗頸伸長基因EUI2(t)的精細定位與克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究以秈稻長穗頸突變體協(xié)青早eB2與粳稻中花14雜交的F<,2>8000個單株作為定位群體,利用Cornell大學的SSR標記和根據(jù)美國TIGR構(gòu)建的BAC跨疊群及其堿基序列開發(fā)的SSR標記,將EUI2(t)基因定位在41.7kb的范圍內(nèi).然后,通過檢測4個不同來源的EUI2(t)突變體的突變位點的方法從候選基因中確定了目的基因,進一步利用RT-PCR的方法檢測目的基因的表達.該研究的主要結(jié)果如下:1.確定與EUI2(t)基因連鎖最緊

2、密的標記RM304與該基因的遺傳距離,并查找RM304在美國TIGR構(gòu)建的BAC跨疊群中所在的位置,下載各BAC的堿基序列,通過DNAman軟件搜索各BAC中的簡單重復序列(SSR),并用該軟件設計引物作為新的SSR標記,構(gòu)建了EUI2(t)基因的精細遺傳圖譜,最終將EUI2(t)基因定位在一個BAC內(nèi)的兩個SSR標記RZH25和RZH37之間.2.通過設計引物擴增共分離標記附近的推測基因,利用酶切后電泳及測序等方法,分別檢測4個不同品

3、系來源的eui2(t)等位突變體(協(xié)青早eB2、龍?zhí)仄謊B2、D297eB2、珍汕97eB2)與它們的原親本的堿基序列差異.3.用特異引物在抽穗期取協(xié)青早B和協(xié)青早eB2穗頸基部進行定量RT-PCR分析.4.EUI2(t)基因在基因組中的堿基序列為1576bp,包含5個外顯子,其讀碼框長為933bp,共編碼311個氨基酸.對編碼的氨基酸序列進行在線BLAST分析,發(fā)現(xiàn)其與煙草中的環(huán)氧化物脫氫酶有很高的同源性(52％).5.根據(jù)季蘭等(1

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