EUI2（t）基因的功能互補(bǔ)驗(yàn)證及RNAi分析.pdf

1、通過(guò)輻射誘變獲得使水稻穗頸節(jié)間伸長(zhǎng)的新基因eui2(t)，本文對(duì)該基因進(jìn)行了精細(xì)定位繼而實(shí)現(xiàn)了圖位克隆；通過(guò)4個(gè)不同來(lái)源的eui2(t)突變體都在同一基因的外顯子區(qū)域發(fā)生堿基缺失而推斷出候選基因。本研究在此基礎(chǔ)上，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化對(duì)候選基因進(jìn)行功能互補(bǔ)驗(yàn)證和RNAi分析。主要結(jié)果如下：1、構(gòu)建了EUI2(t)基因植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-EUI2，轉(zhuǎn)化協(xié)青早eB2與中花14雜交后代F2和F3長(zhǎng)穗頸個(gè)體的幼胚誘導(dǎo)的愈傷組

2、織。共轉(zhuǎn)化愈傷組織塊6597個(gè)，獲得抗性愈傷380個(gè)，平均轉(zhuǎn)化率5.76％；分化得到109個(gè)T0代轉(zhuǎn)化株系，平均分化率為28.68％。對(duì)12個(gè)轉(zhuǎn)基因系的23個(gè)單株的PCR檢測(cè)表明，EUI2(t)基因的候選基因都整合到了水稻基因組中。形態(tài)檢測(cè)表明，只有37-1和82-3是穗頸節(jié)間縮短的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株；其自交后代群體呈現(xiàn)短穗頸和長(zhǎng)穗頸的分離，分別是37：12和38：10。2、構(gòu)建了EUI2(t)基因的RNAi植物表達(dá)載體pCAMBIA130

3、1-EUI2-ihpRNAi，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化中花11和明恢86幼胚誘導(dǎo)的愈傷組織。其中轉(zhuǎn)化明恢86的材料共感染愈傷組織1304個(gè)，獲得抗性愈傷34個(gè)，平均轉(zhuǎn)化率2.60％；分化得到5個(gè)T0代再生轉(zhuǎn)基因系，平均分化率為14.70％，但沒(méi)有得到穗頸節(jié)間伸長(zhǎng)的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株。轉(zhuǎn)中花11的材料共獲得12個(gè)轉(zhuǎn)基因系，55個(gè)成活植株，發(fā)現(xiàn)1個(gè)穗頸節(jié)間顯著伸長(zhǎng)的轉(zhuǎn)基因系?！　”狙芯砍晒?shí)現(xiàn)了候選基因的遺傳轉(zhuǎn)化，證明了EUI2(t)的功能與水稻最