水稻細(xì)胞懸浮系制備和OsPLD基因的cDNA克隆及表達(dá).pdf

1、水稻是世界上重要的糧食作物，懸浮細(xì)胞對(duì)于水稻分子生物學(xué)研究是一個(gè)非常有用的工具。磷脂酶D基因在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。目前，國(guó)內(nèi)還沒有粳稻日本晴細(xì)胞懸浮系以及對(duì)磷脂酶D基因功能研究的相關(guān)報(bào)道。本文以粳稻日本晴為材料，研究其細(xì)胞懸浮系的制備與超低溫保存方法，并對(duì)OsPLD基因進(jìn)行克隆、器官特異性表達(dá)分析以及在酵母中進(jìn)行基因功能鑒定，結(jié)果如下：　　(1)以日本晴水稻的成熟胚為外植體，在pH值為5.8的NB+2mg/L2，4-D

2、+3％Suc+7％Agar培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，25℃、黑暗條件下培養(yǎng)2個(gè)月后，可以得到大量胚性愈傷組織。選擇淡黃色、質(zhì)地疏松的胚性愈傷組織為懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞來源，并在pH值為5.3的液體培養(yǎng)基中，26℃、黑暗條件、110～130rpm/min進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，再過3個(gè)月，即可得到理想的細(xì)胞懸浮系。該懸浮細(xì)胞可以使用一步法進(jìn)行保存，即經(jīng)過含有0.26μg/L的ABA預(yù)培養(yǎng)溶液中培養(yǎng)5d，再用化學(xué)冷凍防護(hù)劑DMSO(10％)+PEG(10％)+

3、Suc(10％)處理，-30℃下脫水2h后投入液氮中長(zhǎng)期保存。日本晴水稻懸浮細(xì)胞系的建立為外源基因的轉(zhuǎn)化提供了理想的受體材料，同時(shí)也為在細(xì)胞水平上研究水稻生理生化指標(biāo)提供均一的材料?！　?2)水稻磷脂酶D(OsPLD)基因是一個(gè)家族基因，至少包含16個(gè)成員，在植物的生長(zhǎng)過程中起重要作用。以水稻整株幼苗為材料，采用RT-PCR方法克隆了磷脂酶D家族基因中OsPLDV1、α1、λ、P14個(gè)基因，全長(zhǎng)分別為2550bp、2439bp、245