水稻和玉米組織特異表達(dá)基因的克隆及功能分析.pdf

1、為了研究水稻分化愈傷組織特異基因和玉米雜種一代特異表達(dá)基因,利用抑制消減雜交法(SSH)建立了水稻分化愈傷組織對愈傷組織的差減文庫及玉米雜種一代和親本的差減文庫.采用DIG-High Prime分別標(biāo)記9311、Nippobare、Nippobare/9311及珍汕97A、珍汕97B、明恢63、汕優(yōu)63的cDNA,分別與水稻(223個(gè))及玉米(190個(gè))的EST作點(diǎn)雜交,比較不同EST在水稻雜種和親本之間的差異表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn):在223個(gè)

2、水稻EST中秈秈雜種共檢測到22個(gè)差異EST,占9.9﹪,秈粳雜種中檢測到33個(gè)差異EST,占14.8﹪;在190個(gè)玉米EST中,秈秈雜種檢測到18個(gè)差異EST,占9.5﹪,在秈梗雜種中檢測到25個(gè)EST,占13.2﹪;說明親緣關(guān)系越遠(yuǎn),雜種一代中差異表達(dá)基因成員越多.利用SSH分離得到的片段,分別克隆了水稻RNase L inhibitor(rice-RLI)和rFCA基因的全長cDNA,并對它們的基因組序列及功能進(jìn)行了初步研究.在擬

3、南芥中,FCA基因具有控制植物花期轉(zhuǎn)換的作用.通過篩選SSH文庫并結(jié)合RACE技術(shù),在水稻中克隆到了FCA的同源基因rFCA.RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)rFCA在水稻葉片組織中存在4種可變剪接cDNA序列,分別命名為rFCA-1、rFCA-2、rFCA-3和rFCA-4.同源性搜索顯示rFCA-1編碼蛋白與擬南芥FCA-gamma具有較高的同源性,Conserved Domain Search分析表明rFCA-1、rFCA-3和rFCA-4編

4、碼的蛋白均具有FCA-gamma的保守功能域(RNA結(jié)合區(qū)和WW-domain),但是rFCA-3和rFCA-4缺少5'端富含Glycine的區(qū)域的101個(gè)氨基酸,而rFCA-2編碼的蛋白缺少WW-domain.熒光定量PCR發(fā)現(xiàn),在4種rFCA的可變剪接中rFCA-1的相對含量最高;rFCA-1在分化愈傷組織中的表達(dá)明顯強(qiáng)于在愈傷組織中的表達(dá);在不同品種的葉片組織中,rFCA-1的表達(dá)量變化不大;在珍汕97B的第一次枝梗原基分化期的幼