金魚PP2A-B′家族δ基因cDNA的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、蛋白磷酸酶行使的去磷酸化作用在調(diào)控細(xì)胞內(nèi)各種生命過(guò)程中起了重要的作用。PP2A是主要的絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶之一。本實(shí)驗(yàn)室之前已經(jīng)研究了PP2A催化亞基在金魚和小白鼠眼睛中表達(dá)模式，在本論文中，我們把重點(diǎn)放在了研究PP2A的調(diào)節(jié)亞基B’家族δ（Delta）基因，首先，我們運(yùn)用RACE技術(shù)克隆出了金魚中的δ基因的cDNA全長(zhǎng)，然后，利用RT—PCR和Western blot分別分析并研究了該基因在金魚不同組織和不同胚胎時(shí)期的mRNA水平和蛋

2、白水平的表達(dá)，其結(jié)果如下： （1）金魚中PP2A B'—δ的cDNA全長(zhǎng)2415bp，其中包含1668bp的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)含555個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)的分子量約為64.4kDa。該蛋白質(zhì)序列與人的同源序列的相似度為81.8％，與家鼠的為85.2％，與非洲爪蟾的為78.7％，氨基酸序列同源性比較表明了δ調(diào)節(jié)亞基的氨基酸序列在不同物種間都具有比較高的同源性，暗示了該基因在進(jìn)化和功能上的保守性，同時(shí)也說(shuō)明其在功能上的重要性，

3、而在氨基和羧基末端的差異則暗示了B'亞基具有的多種功能，如決定底物的特異性和細(xì)胞定位。 （2） RT—PCR分析證明該基因mRNA表達(dá)水平在大腦中為最高，肝臟、精巢、卵巢、腎臟和鰓中次之，鰭中最少。在不同胚胎時(shí)期中，兩細(xì)胞期、多細(xì)胞期、囊胚期和原腸胚期表達(dá)最高，其他時(shí)期相對(duì)較低。在蛋白水平上，精巢、卵巢、大腦和心臟中最高，肝臟中次之，腎臟、鰓和鰭中最少。在胚胎中，兩細(xì)胞期、多細(xì)胞期、囊胚期、原腸胚期和神經(jīng)胚期及視原基期表達(dá)最高