15704.桿狀病毒acmnpv核殼體蛋白p7883磷酸化的功能與意義

1、桿狀病毒AcMNPV核殼體蛋白P78／83磷酸化的功能與意義摘要桿狀病毒(Baculoviruses)是一類特異感染節(jié)肢動物的雙鏈DNA病毒，主要感染鱗翅目昆蟲。桿狀病毒基因組較大，約80180kb。在其生活周期中存在兩種病毒粒子形態(tài)，首先產生的出芽型病毒粒子BV(Buddedvirus)，介導細胞間的感染；最后隨著蟲體死亡或細胞裂解釋放出包埋型病毒粒子ODV(Occlusionderivedvirus)，介導蟲體間的感染。苜蓿銀紋夜蛾

2、核型多角體病毒AcMNPV(Autographacalifornicamultiplenucleopolyhedrovirus)作為桿狀病毒的模式病毒而被廣泛研究。AcMNPV基因組包含154個基因，其中晚期基因ac9(p78／83)編碼的核衣殼蛋白P78／83是核衣殼的次要組成蛋白，位于核衣殼的基底部。P78／83是一個磷酸化的蛋白質，但是其磷酸化的功能和意義還沒有報道。論文第一章的綜述部分首先簡單介紹了桿狀病毒基本情況及其基因組特征

3、。進而重點概述了桿狀病毒感染誘導的宿主細胞肌動蛋白聚合，包括肌動蛋白聚合的分子基礎，肌動蛋白的聚合和調節(jié)機制及桿狀病毒感染引起的宿主肌動蛋白的重排。最后介紹了AcMNPV核衣殼蛋白P78／83的研究進展，提出了本論文的目的和意義。第二章描述了利用BactoBac系統(tǒng)，構建P78／83磷酸化位點突變的重組病毒，初步探討了P78／83的磷酸化狀態(tài)對AcMNPV在Sf9細胞中增殖的影響。轉染再感染實驗結果表明：缺失ac9基因的vAcP78腮3

4、Ko不能產生BV病毒粒子；回復了ac9的vAcP78腮3、ⅣT可以成功拯救ac9基因缺失帶來的影響；P78／83的各種模擬磷酸化突變體相對于去磷酸化突變體更加有利于病毒復制；P78／83的T256磷酸化位點的突變對于病毒復制的影響最顯著。第三章通過構建P78／83七個磷酸化位點點突變的超表達質粒。初步探討了P78／83的磷酸化狀態(tài)對其自身功能的影響。蛋白質印記和免疫共沉淀結果表明P78／83的磷酸化狀態(tài)對其自身的穩(wěn)定性、與C42的相互作

5、用沒有顯著影響；C42與EC27沒有直接相互作用；P78／83的各種磷酸化突變體相對于C42P78／83EC27的相互作用沒有顯著影響。VnucleocapsidproteinP78／83phosphorylationsitesAbstractIIIBaculovirusesareaverydiversegroupofarthropodspecificlargeDNAviruses，mainlymembersoftheinsectord

6、erLepidopteraBaculovirusesarecharacterizedbyadoublestrandedsupercoiledDNAgenomerangingfrom80toover180kbDuringthelifecycleinthehostcells，theyproducetwodistinctformsofvirions：occludedvirions(ODV)andbuddedvirions(BV)BVsared

7、erivedfromnucleocapsidsleavingthecellnucleusandbuddingthroughtheplasmamembrane，andmediatethespreadofinfectionfromcelltocellLateinbaculovirusinfectionODVsareformedfromnucleocapsidsretainedinthenucleus，whichsubsequentlyemb

8、eddedwithinacrystallinematrixofproteinandreleasedintotheenvironmentuponthedeathofthehostODVsareresponsibleforlateraltransmissionbetweeninsectsAutographacalifomicamulticapsidnucleopolyhedrovirus(AcMNPV)，asthemodelvirusoft

9、hegenusAlphabaculovirusoftheBaculoviridaefamilyisoneofthebestcharacterizedbaculovirusesAcMNPVgenomecotains154predictedopenreadingframes(ORFs)AcMNPVlategeneac9isacoregeneconservedinallsequencedlepidopteranNPVgenomesac9enc

10、odesaminornucleocapsidproteinP78／83，localizedtothebasalregionofmenucleocapsidsP78／83，aviralWiskott—Aldrichsyndromeprotein(WASP)likeprotein，isaphosphorylatedproteinHowever，thefunctionandsignificanceofphosphorylationremain

11、sunknownChapteronegivesabriefintroductionofbaculoviruses，characteristicsofbaculovirusesgenomeThensummarizedtheactinpolymerizationinducedbybaculoviruses，focusingonthethemolecularbasisofactinpolymerization，regulatingmechan

12、ismofactinpolymerizationandactinskeletonrearrangementinducedbybaculovirusesinfection，followingbytherecentresearchprogressonP78／83Intheend，theaimsandsignificanceofthisthesisarepresentedInchaptertwo，inordertounderstandthee

13、ffectofphosphorylationstatusofP78／83onvirusvibialt，r，weconstructedrecombinantvirusvAcP78，83s152A／D，vAcP78，83s15㈣，vAcP78，83T168觚，vAcP78，83T25伽，vAcP78／83s346肌，vAcP78，83T35伽，vAcP78／83T365觚，vAcP78／83WTgpandvAcP78，83Ko卿withth