羊梭菌病三聯(lián)四防苗厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基的研制與應用.pdf

1、　　本研究根據(jù)微生物對營養(yǎng)物質的需求和厭氧菌自身的生長代謝理論，采用對比、優(yōu)化試驗方法，對羊梭菌病三聯(lián)四防苗生產(chǎn)使用的產(chǎn)氣莢膜梭菌B型、D型和腐敗梭菌三種厭養(yǎng)菌進行了培養(yǎng)基的研究與應用試驗。通過對產(chǎn)氣莢膜梭菌B、D型和腐敗梭菌的多次培養(yǎng)試驗，研制成功了新的厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅱ。厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅱ可以作為上述三種細菌的通用培養(yǎng)基。厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅰ與厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅱ相比，培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌D型效果相同，培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌B型和腐敗梭菌效果略差，成

2、本略低。因此生產(chǎn)中可以分別配制上述培養(yǎng)基使用。　　產(chǎn)氣莢膜梭菌(B型、D型)和腐敗梭菌在研制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長情況良好，產(chǎn)毒能力強，可達到《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(2000年版)規(guī)定的產(chǎn)毒高標準。配制疫苗的免疫原性達到了《規(guī)程》規(guī)定的質量標準，疫苗成品檢驗全部合格。同時，測定了產(chǎn)氣莢膜梭菌B型、D型和腐敗梭菌在這種新研制的培養(yǎng)基中的生長曲線和產(chǎn)毒特性，從而掌握了這些細菌在新研制培養(yǎng)基中的生長產(chǎn)毒規(guī)律。結果表明，產(chǎn)氣莢膜梭菌

3、B型經(jīng)2h的適應期后，很快進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)到8h細菌密度接近最高值，OD630為4.329；經(jīng)檢測，培養(yǎng)4-24h的細菌所產(chǎn)生的毒素(培養(yǎng)物上清)0.001-0.002ml2/2致死KM小鼠。產(chǎn)氣莢膜梭菌D型的生長速度也較快，無適應期就直接進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)到12h時細菌密度最高，OD630為1.75；細菌最佳產(chǎn)毒期在6-14h，培養(yǎng)物上清0.0005-0.00065ml2/2致死KM小鼠。腐敗梭菌生長速度較慢，經(jīng)6h的適應期后，

4、才能進入對數(shù)生長期，培養(yǎng)到14h時細菌密度最高，OD630為1.335；細菌毒力在培養(yǎng)后的6-24h內0.01ml菌液可達到在24h內2/2致死KM小鼠的效果。通過生產(chǎn)曲線的測定和產(chǎn)毒規(guī)律的探索，指導疫苗的生產(chǎn)培養(yǎng)周期。各細菌生產(chǎn)疫苗過程中的培養(yǎng)時間與《規(guī)程》規(guī)定的培養(yǎng)時間相比，可縮短2-10h不等?！　≡撗兄频呐囵B(yǎng)基，配制方法簡單，質量穩(wěn)定，可重復性好，達到較高的細菌密度和產(chǎn)毒效果。節(jié)約人力和時間，所有需要的配制用試劑均可以成品方式