大黃魚(yú)GDF—8基因的克隆及序列分析.pdf

1、大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea）,俗稱黃魚(yú)、黃花魚(yú)，為暖溫性集群洄游魚(yú)類。肌肉中富含氨基酸，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是我省重要的經(jīng)濟(jì)海洋魚(yú)類。然而經(jīng)過(guò)了多年養(yǎng)殖后，養(yǎng)殖大黃魚(yú)群體出現(xiàn)了經(jīng)濟(jì)性的衰退現(xiàn)象，如生長(zhǎng)緩慢、成熟提早、親魚(yú)個(gè)體變小及肉質(zhì)變差等，這些因素直接影響到大黃魚(yú)的產(chǎn)量、銷售和商品的價(jià)格。 1997年McPherron等從小鼠骨骼肌cDNA文庫(kù)中克隆到了一個(gè)新基因，即生長(zhǎng)分化因子-8（growth an

2、d differential factor-8，GDF—8）基因，并發(fā)現(xiàn)該基因主要在小鼠的骨骼肌中表達(dá)，由于它對(duì)骨骼肌的生長(zhǎng)具有抑制作用，因而又被稱為肌肉生長(zhǎng)抑制素（myostatin）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)GDF-8基因敲除的小鼠，其骨骼肌重量增加非常明顯，是正常野生型小鼠的2倍左右。除了骨骼肌重量明顯增加外，GDF-8基因敲除的小鼠其體內(nèi)脂肪形成還明顯減少。因此，可以通過(guò)抑制GDF-8基因的活性，提高養(yǎng)殖品種的肌肉含量，促進(jìn)養(yǎng)殖品種的生長(zhǎng)

3、。 本實(shí)驗(yàn)以我省主要海水養(yǎng)殖魚(yú)類大黃魚(yú)研究對(duì)象，在對(duì)已報(bào)道的幾種動(dòng)物GDF-8基因序列分析的基礎(chǔ)上，根據(jù)其序列的保守性設(shè)計(jì)引物，利用PCR法擴(kuò)增和克隆大黃魚(yú)GDF-8基因，隨后對(duì)克隆產(chǎn)物測(cè)序，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示大黃魚(yú)GDF-8基因序列當(dāng)中起始密碼子到終止密碼子之間的長(zhǎng)度為2232bp，其中包括外顯子Ⅰ379bp，內(nèi)含子Ⅰ3443bp，外顯子Ⅱ371bp，內(nèi)含子Ⅱ758，外顯子Ⅲ381。兩個(gè)內(nèi)含子共1101bp，編碼序

4、列（三個(gè)外顯子區(qū)域）共1131bp，編碼376個(gè)氨基酸。對(duì)序列進(jìn)行相似性分析表明大黃魚(yú)GDF-8基因序列和其他魚(yú)類GDF-8基因序列還有哺乳類GDF-8基因序列相比，不管是在核酸水平還是在氨基酸水平上的相似性都很高。多重序列比較的結(jié)果顯示生長(zhǎng)分化因子beta區(qū)域（282-376）在RXXR motif（264-267，RARR匹配RXXR的位點(diǎn)）和C基末端之間，從魚(yú)類到人類都是高度保守的。 另外信號(hào)肽的預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，大黃魚(yú)GDF