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文檔簡介
1、養(yǎng)殖環(huán)境的嚴(yán)重惡化等多種因素導(dǎo)致養(yǎng)殖大黃魚肉質(zhì)變差,已經(jīng)成為影響大黃魚養(yǎng)殖效益的重要因素,脂肪代謝相關(guān)基因其中包括過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisomeproliferator-activated receptors,PPARs)基因在大黃魚品質(zhì)、風(fēng)味的形成過程中具有重要作用。PPARs被脂肪酸以及它們的類花生酸代謝產(chǎn)物等配體激活,然后被激活的受體與視黃醇類X受體(Retinoid X receptor,RXR)結(jié)合成異源二聚
2、體,然后結(jié)合與多種脂肪代謝相關(guān)酶的基因啟動子區(qū)域的過氧化物酶體激活受體反應(yīng)元件(Peroxisome proliferator responsedement,PPRE)結(jié)合從而調(diào)節(jié)其活動。其中受PPAR調(diào)控的基因包括脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL,EC3.1.1.34)基因、解偶聯(lián)蛋白2(Uneoupling protein2,UCP2)基因、肝型-脂肪酸結(jié)合蛋白(Liver-fatty acid bmdmg
3、 protein,L-FABP)基因。
本研究利用RT-PCR和RACE-PCR技術(shù)克隆了大黃魚PPARa、PPARB、PPAR7、LPL、IJCP2基因全長cDNA序列,研究了它們在大黃魚不同組織的表達譜,并且擴增獲得它們的部分基因組序列。結(jié)果表明:⑴大黃魚PPARa基因eDNA全長1601bp,編碼區(qū)長1437bp,編碼的蛋白質(zhì)含478個氨基酸,預(yù)測分子量53.3962kDa;大黃魚PPARB基因cDNA全長1759b
4、p,編碼區(qū)長1377bp,編碼的蛋白質(zhì)含458個氨基酸,預(yù)測分子量50.9559kDa;大黃魚PPARγ基因cDNA全長1815bp,編碼區(qū)1569bp,編碼的蛋白質(zhì)含522個氨基酸,預(yù)測分子量59.1071kDa;大黃魚LPL,基因cDNA全長1957bp,編碼區(qū)長1545bp,編碼的蛋白質(zhì)含514個氨基酸,預(yù)測分子量58.1425kDa;大黃魚UCP2基因cDNA全長1478bp,編碼區(qū)長939bp,編碼的蛋白質(zhì)含312個氨基酸,預(yù)
5、測分子量33.526kDa。⑵擴增得到了大黃魚上述5個基因包含內(nèi)含子的部分基因組序列,其中PPARa基因片段1307bp,包含4個外顯子和3個內(nèi)含子;PPARB基因片段2986bp,含有6個外顯子和5個內(nèi)含子;PPARγ基因片段1133bp,包含了2個不完整的外顯子和1個完整的內(nèi)含子;LPL基因獲得了2個片段,分別為2380bp和1402bp,各含有4個外顯子和3個內(nèi)含子;UCP2基因片段1473 bp,含有6個外顯子和5個內(nèi)含子。⑶采
6、用Real time PCR技術(shù)研究了大黃魚上述5個基因的組織表達譜,結(jié)果表明,PPARa、PPARB、PPARγ基因在大部分組織都有表達,其中PPARa在肝臟中表達量最高,其次為心臟和腦;PPARB基因在肝臟組織中表達量最高,其次為腦和性腺以及鰓組織;PPARγ基因也是在肝臟組織中表達量最高,其次為心臟和胃以及腸組織。大黃魚LPL基因在檢測的組織中都有表達,在肝臟中表達量最高,其次為肌肉。大黃魚UCP2在心臟中表達量很高,在其它組織中
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