大黃魚(yú)部分脂肪代謝相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、養(yǎng)殖環(huán)境的嚴(yán)重惡化等多種因素導(dǎo)致養(yǎng)殖大黃魚(yú)肉質(zhì)變差,已經(jīng)成為影響大黃魚(yú)養(yǎng)殖效益的重要因素,脂肪代謝相關(guān)基因其中包括過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisomeproliferator-activated receptors,PPARs)基因在大黃魚(yú)品質(zhì)、風(fēng)味的形成過(guò)程中具有重要作用。PPARs被脂肪酸以及它們的類(lèi)花生酸代謝產(chǎn)物等配體激活,然后被激活的受體與視黃醇類(lèi)X受體(Retinoid X receptor,RXR)結(jié)合成異源二聚

2、體,然后結(jié)合與多種脂肪代謝相關(guān)酶的基因啟動(dòng)子區(qū)域的過(guò)氧化物酶體激活受體反應(yīng)元件(Peroxisome proliferator responsedement,PPRE)結(jié)合從而調(diào)節(jié)其活動(dòng)。其中受PPAR調(diào)控的基因包括脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL,EC3.1.1.34)基因、解偶聯(lián)蛋白2(Uneoupling protein2,UCP2)基因、肝型-脂肪酸結(jié)合蛋白(Liver-fatty acid bmdmg

3、 protein,L-FABP)基因。
　　 本研究利用RT-PCR和RACE-PCR技術(shù)克隆了大黃魚(yú)PPARa、PPARB、PPAR7、LPL、IJCP2基因全長(zhǎng)cDNA序列,研究了它們?cè)诖簏S魚(yú)不同組織的表達(dá)譜,并且擴(kuò)增獲得它們的部分基因組序列。結(jié)果表明：⑴大黃魚(yú)PPARa基因eDNA全長(zhǎng)1601bp,編碼區(qū)長(zhǎng)1437bp,編碼的蛋白質(zhì)含478個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量53.3962kDa;大黃魚(yú)PPARB基因cDNA全長(zhǎng)1759b

4、p,編碼區(qū)長(zhǎng)1377bp,編碼的蛋白質(zhì)含458個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量50.9559kDa;大黃魚(yú)PPARγ基因cDNA全長(zhǎng)1815bp,編碼區(qū)1569bp,編碼的蛋白質(zhì)含522個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量59.1071kDa;大黃魚(yú)LPL,基因cDNA全長(zhǎng)1957bp,編碼區(qū)長(zhǎng)1545bp,編碼的蛋白質(zhì)含514個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量58.1425kDa;大黃魚(yú)UCP2基因cDNA全長(zhǎng)1478bp,編碼區(qū)長(zhǎng)939bp,編碼的蛋白質(zhì)含312個(gè)氨基酸,預(yù)

5、測(cè)分子量33.526kDa。⑵擴(kuò)增得到了大黃魚(yú)上述5個(gè)基因包含內(nèi)含子的部分基因組序列,其中PPARa基因片段1307bp,包含4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子;PPARB基因片段2986bp,含有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子;PPARγ基因片段1133bp,包含了2個(gè)不完整的外顯子和1個(gè)完整的內(nèi)含子;LPL基因獲得了2個(gè)片段,分別為2380bp和1402bp,各含有4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子;UCP2基因片段1473 bp,含有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子。⑶采

6、用Real time PCR技術(shù)研究了大黃魚(yú)上述5個(gè)基因的組織表達(dá)譜,結(jié)果表明,PPARa、PPARB、PPARγ基因在大部分組織都有表達(dá),其中PPARa在肝臟中表達(dá)量最高,其次為心臟和腦;PPARB基因在肝臟組織中表達(dá)量最高,其次為腦和性腺以及鰓組織;PPARγ基因也是在肝臟組織中表達(dá)量最高,其次為心臟和胃以及腸組織。大黃魚(yú)LPL基因在檢測(cè)的組織中都有表達(dá),在肝臟中表達(dá)量最高,其次為肌肉。大黃魚(yú)UCP2在心臟中表達(dá)量很高,在其它組織中