PCR方法鑒定牛胚胎性別技術的研究.pdf

1、　　本試驗研究了PCR方法鑒定牛胚胎性別技術，并優(yōu)化了PCR反應體系和反應條件，以期該技術能在生產中得到應用。試驗結果如下：試驗設計合成了4對牛Y染色體特異引物B90、B12、B34、B56和3對牛常染色體特異引物A34、A56、A78，并引用了1對牛Y染色體特異引物B78和1對牛常染色體特異引物A12。利用這些引物分別對?；蚪MDNA、體外培養(yǎng)的牛成纖維細胞進行PCR擴增，篩選出了2個擴增效果較好的引物組合，分別為A12/B34和A1

2、2/B78?！　±靡锝M合A12/B34建立了基本的PCR反應體系，研究了該反應體系中引物的濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度、酶含量以及退火溫度、循環(huán)次數對PCR擴增效果的影響?！　”驹囼炇状尾捎脙蓽囟妊h(huán)PCR方法對牛早期胚胎樣品進行性別鑒定。PCR反應程序省去延伸步驟，變性和退火時間都為1秒，PCR運行時間縮短為37分鐘左右，幾乎將PCR擴增時間縮短到了極限，而擴增的效果仍然很好。具體的反應程序為：94℃預變性4分鐘，(94℃

3、變性1秒，56℃退火1秒)×30循環(huán)，然后延伸3分鐘。　　本試驗共鑒定了27枚胚胎的性別，結果為14枚雌性胚胎，13枚雄性胚胎。所有胚胎全部移植，14頭受體牛妊娠，妊娠率51.9％(14/27)。已出生牛犢6頭，3雌3雄，性別符合率為100％?！　×硗?，還用所有的牛Y染色體特異引物和牛常染色體引物A12分別對雄性牦牛、綿羊、山羊、小鼠以及人的基因組DNA進行了同源檢測，發(fā)現對?；蚪MDNA擴增良好的引物對牦?；蚪MDNA擴增效果也很