PCR方法鑒定牛胚胎性別技術(shù)的研究.pdf

1、　　本試驗(yàn)研究了PCR方法鑒定牛胚胎性別技術(shù)，并優(yōu)化了PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，以期該技術(shù)能在生產(chǎn)中得到應(yīng)用。試驗(yàn)結(jié)果如下：試驗(yàn)設(shè)計(jì)合成了4對(duì)牛Y染色體特異引物B90、B12、B34、B56和3對(duì)牛常染色體特異引物A34、A56、A78，并引用了1對(duì)牛Y染色體特異引物B78和1對(duì)牛常染色體特異引物A12。利用這些引物分別對(duì)?；蚪MDNA、體外培養(yǎng)的牛成纖維細(xì)胞進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選出了2個(gè)擴(kuò)增效果較好的引物組合，分別為A12/B34和A1

2、2/B78?！　±靡锝M合A12/B34建立了基本的PCR反應(yīng)體系，研究了該反應(yīng)體系中引物的濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度、酶含量以及退火溫度、循環(huán)次數(shù)對(duì)PCR擴(kuò)增效果的影響。　　本試驗(yàn)首次采用兩溫度循環(huán)PCR方法對(duì)牛早期胚胎樣品進(jìn)行性別鑒定。PCR反應(yīng)程序省去延伸步驟，變性和退火時(shí)間都為1秒，PCR運(yùn)行時(shí)間縮短為37分鐘左右，幾乎將PCR擴(kuò)增時(shí)間縮短到了極限，而擴(kuò)增的效果仍然很好。具體的反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4分鐘，(94℃

3、變性1秒，56℃退火1秒)×30循環(huán)，然后延伸3分鐘?！　”驹囼?yàn)共鑒定了27枚胚胎的性別，結(jié)果為14枚雌性胚胎，13枚雄性胚胎。所有胚胎全部移植，14頭受體牛妊娠，妊娠率51.9％(14/27)。已出生牛犢6頭，3雌3雄，性別符合率為100％。　　另外，還用所有的牛Y染色體特異引物和牛常染色體引物A12分別對(duì)雄性牦牛、綿羊、山羊、小鼠以及人的基因組DNA進(jìn)行了同源檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)?；蚪MDNA擴(kuò)增良好的引物對(duì)牦牛基因組DNA擴(kuò)增效果也很